科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2012年
9期
2014-2018,2022
,共6页
罗泰来%张薇%郝彦斐%康健%王平%柏银兰%王丽梅%徐志凯
囉泰來%張薇%郝彥斐%康健%王平%柏銀蘭%王麗梅%徐誌凱
라태래%장미%학언비%강건%왕평%백은란%왕려매%서지개
结核分枝杆菌%休眠相关抗原%Rv2031c%Rv2626c%耻垢分枝杆菌
結覈分枝桿菌%休眠相關抗原%Rv2031c%Rv2626c%恥垢分枝桿菌
결핵분지간균%휴면상관항원%Rv2031c%Rv2626c%치구분지간균
利用大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,构建能够表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.s).采用聚合酶链反应(PCR)方法,从MTB H37Rv基因组DNA中扩增MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段并克隆入pMD18-T载体.序列测定正确后分别亚克隆入大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pDE22.将重组载体pDE22-Rv2031 c-Rv2626c电穿孔导入M.s,42℃热诱导表达目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot分析.利用PCR方法扩增获得MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段,大小分别为435 bp和480 bp.基因测序与Genebank公布的基因序列完全一致.SDS-PAGE分析结果表明重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿导入M.s后能够特异性表达目的蛋白,大小约为35 kDa,与理论值相符.Western-blot 鉴定结果表明抗Rv2031c和抗Rv2626c的单克隆抗体均能够与目的蛋白发生特异性的反应,大小相一致.成功构建表达MTB休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组M.s,并命名为Rv2031c-Rv2626c-rM.s,为其用于结核新型疫苗的研究奠定了基础.
利用大腸埃希菌—分枝桿菌穿梭錶達載體pDE22,構建能夠錶達結覈分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)休眠相關抗原Rv2031c-Rv2626c融閤蛋白的重組恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis,M.s).採用聚閤酶鏈反應(PCR)方法,從MTB H37Rv基因組DNA中擴增MTB休眠相關抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段併剋隆入pMD18-T載體.序列測定正確後分彆亞剋隆入大腸埃希菌—分枝桿菌穿梭錶達載體pDE22.將重組載體pDE22-Rv2031 c-Rv2626c電穿孔導入M.s,42℃熱誘導錶達目的蛋白,併進行SDS-PAGE和Western-blot分析.利用PCR方法擴增穫得MTB休眠相關抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段,大小分彆為435 bp和480 bp.基因測序與Genebank公佈的基因序列完全一緻.SDS-PAGE分析結果錶明重組載體pDE22-Rv2031c-Rv2626c電穿導入M.s後能夠特異性錶達目的蛋白,大小約為35 kDa,與理論值相符.Western-blot 鑒定結果錶明抗Rv2031c和抗Rv2626c的單剋隆抗體均能夠與目的蛋白髮生特異性的反應,大小相一緻.成功構建錶達MTB休眠相關抗原Rv2031c-Rv2626c融閤蛋白的重組M.s,併命名為Rv2031c-Rv2626c-rM.s,為其用于結覈新型疫苗的研究奠定瞭基礎.
이용대장애희균—분지간균천사표체재체pDE22,구건능구표체결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis,MTB)휴면상관항원Rv2031c-Rv2626c융합단백적중조치구분지간균(Mycobacterium smegmatis,M.s).채용취합매련반응(PCR)방법,종MTB H37Rv기인조DNA중확증MTB휴면상관항원Rv2031c화Rv2626c기인편단병극륭입pMD18-T재체.서렬측정정학후분별아극륭입대장애희균—분지간균천사표체재체pDE22.장중조재체pDE22-Rv2031 c-Rv2626c전천공도입M.s,42℃열유도표체목적단백,병진행SDS-PAGE화Western-blot분석.이용PCR방법확증획득MTB휴면상관항원Rv2031c화Rv2626c기인편단,대소분별위435 bp화480 bp.기인측서여Genebank공포적기인서렬완전일치.SDS-PAGE분석결과표명중조재체pDE22-Rv2031c-Rv2626c전천도입M.s후능구특이성표체목적단백,대소약위35 kDa,여이론치상부.Western-blot 감정결과표명항Rv2031c화항Rv2626c적단극륭항체균능구여목적단백발생특이성적반응,대소상일치.성공구건표체MTB휴면상관항원Rv2031c-Rv2626c융합단백적중조M.s,병명명위Rv2031c-Rv2626c-rM.s,위기용우결핵신형역묘적연구전정료기출.
