中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
3期
264-267
,共4页
张辉%肖少波%方六荣%牛传双%陈焕春
張輝%肖少波%方六榮%牛傳雙%陳煥春
장휘%초소파%방륙영%우전쌍%진환춘
伪狂犬病病毒%UL14%序列分析%表达
偽狂犬病病毒%UL14%序列分析%錶達
위광견병병독%UL14%서렬분석%표체
从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中克隆含UL14基因的BamH I第3片段并进行序列分析.根据测定的序列设计1对能扩增UL14基因完整编码区的引物,PCR扩增UL14基因并将其插入原核表达载体pGEX-KG,获得原核表达质粒pKG-UL14,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下,GSY-UL14融合蛋白获得高效表达,表达产物的相对分子质量为44 000,并以包涵体形式存在.纯化的表达产物免疫兔,获得了针对UL14蛋白的高效价多抗血清.进一步将UL14基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中EGFP基因的3'端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL14.转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察发现,转染后24、48 h的融合蛋白EGFP-UL14主要定位在胞浆,但转染后72 h的融合蛋白主要定位在细胞核.上述研究结果为进一步阐明UL14的结构与功能奠定了基础.
從偽狂犬病病毒Ea株基因組DNA中剋隆含UL14基因的BamH I第3片段併進行序列分析.根據測定的序列設計1對能擴增UL14基因完整編碼區的引物,PCR擴增UL14基因併將其插入原覈錶達載體pGEX-KG,穫得原覈錶達質粒pKG-UL14,轉化BL21(DE3),在IPTG誘導下,GSY-UL14融閤蛋白穫得高效錶達,錶達產物的相對分子質量為44 000,併以包涵體形式存在.純化的錶達產物免疫兔,穫得瞭針對UL14蛋白的高效價多抗血清.進一步將UL14基因剋隆到真覈錶達載體pEGFP-C1中EGFP基因的3'耑,穫得與EGFP融閤錶達的真覈錶達質粒pEGFP-UL14.轉染Hela細胞,通過熒光顯微鏡觀察髮現,轉染後24、48 h的融閤蛋白EGFP-UL14主要定位在胞漿,但轉染後72 h的融閤蛋白主要定位在細胞覈.上述研究結果為進一步闡明UL14的結構與功能奠定瞭基礎.
종위광견병병독Ea주기인조DNA중극륭함UL14기인적BamH I제3편단병진행서렬분석.근거측정적서렬설계1대능확증UL14기인완정편마구적인물,PCR확증UL14기인병장기삽입원핵표체재체pGEX-KG,획득원핵표체질립pKG-UL14,전화BL21(DE3),재IPTG유도하,GSY-UL14융합단백획득고효표체,표체산물적상대분자질량위44 000,병이포함체형식존재.순화적표체산물면역토,획득료침대UL14단백적고효개다항혈청.진일보장UL14기인극륭도진핵표체재체pEGFP-C1중EGFP기인적3'단,획득여EGFP융합표체적진핵표체질립pEGFP-UL14.전염Hela세포,통과형광현미경관찰발현,전염후24、48 h적융합단백EGFP-UL14주요정위재포장,단전염후72 h적융합단백주요정위재세포핵.상술연구결과위진일보천명UL14적결구여공능전정료기출.
