CAJ | 학술논문

目的:构建真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立M-CSF核内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的核内作用奠定基础.方法:采用PCR扩增人M-CSF活性片段,将M-CSF片段插入真核表达载体pCMV/myc/nuc,强制性把M-CSF引入细胞核内,通过PCR、测序鉴定筛选阳性重组体pCMV/M-CSF,脂质体介导转染HeLa细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光鉴定其在HeLa细胞中的表达及定位分布.结果:琼脂糖电泳结果显示插入片段为1 400 bp左右,与预期M-CSF分子大小相当;DNA测序分析表明插入质粒的M-CSF无读码框移位,并与来源序列一致.RT-PCR和间接免疫荧光检测表明,转染pCMV/M-CSF的HeLa细胞能稳定表达M-CSF mRNA与M-CSF蛋白,且表达的M-CSF定位于HeLa细胞的细胞核.结论:成功构建了真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立了M-CSF核内稳定表达细胞系.
목적:구건진핵세포pCMV/nuc/M-CSF재체,건립M-CSF핵내은정표체세포계,위진일보연구M-CSF적핵내작용전정기출.방법:채용PCR확증인M-CSF활성편단,장M-CSF편단삽입진핵표체재체pCMV/myc/nuc,강제성파M-CSF인입세포핵내,통과PCR、측서감정사선양성중조체pCMV/M-CSF,지질체개도전염HeLa세포,경G418사선후,용RT-PCR、간접면역형광감정기재HeLa세포중적표체급정위분포.결과:경지당전영결과현시삽입편단위1 400 bp좌우,여예기M-CSF분자대소상당;DNA측서분석표명삽입질립적M-CSF무독마광이위,병여래원서렬일치.RT-PCR화간접면역형광검측표명,전염pCMV/M-CSF적HeLa세포능은정표체M-CSF mRNA여M-CSF단백,차표체적M-CSF정위우HeLa세포적세포핵.결론:성공구건료진핵세포pCMV/nuc/M-CSF재체,건립료M-CSF핵내은정표체세포계.