肿瘤预防与治疗
腫瘤預防與治療
종류예방여치료
JOURNAL OF CANCER CONTROL AND TREATMENT
2009年
2期
122-125
,共4页
自杀基因%胞嘧啶脱氨酶%尿嘧啶磷酸核糖转移酶%表达型质粒载体PMG-36e%PCR聚合酶链反应%质粒构建
自殺基因%胞嘧啶脫氨酶%尿嘧啶燐痠覈糖轉移酶%錶達型質粒載體PMG-36e%PCR聚閤酶鏈反應%質粒構建
자살기인%포밀정탈안매%뇨밀정린산핵당전이매%표체형질립재체PMG-36e%PCR취합매련반응%질립구건
目的:探讨利用分子生物学基因重组技术构建PMG-36e-CD::upp自杀基因重组质粒的方法.方法:用小量制备质粒DNA的方法分别提取表达型质粒载体PMG-36e和自杀基因pORF-CD::upp,以质粒pORF-CD::upp为模板PCR扩增CD::upp基因,表达型质粒载体PMG-36e与自杀基因CD::upp分别用限制性内切酶Sac Ⅰ与Sal Ⅰ进行双酶切,T4DNA连接酶16℃恒温水浴过夜连接,转化入感受态JM109,筛选单克隆提取重组质粒PMG-36e-CD::UPP进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,双酶切鉴定,PCR鉴定,及测序鉴定.结果:重组质粒PMG-36e-CD::upp经1%琼脂糖凝胶鉴定,分子量为5.5Kb,与其标准分子量大小一致;重组质粒PMG-36e-CD::upp经双酶切鉴定及PCR初步鉴定构建成功;送上海生物工程技术服务有限公司测序认证,同源性达100%.结论:重组质粒PMG-36e-CD::upp可成功构建,可用于后续实验的表达研究.
目的:探討利用分子生物學基因重組技術構建PMG-36e-CD::upp自殺基因重組質粒的方法.方法:用小量製備質粒DNA的方法分彆提取錶達型質粒載體PMG-36e和自殺基因pORF-CD::upp,以質粒pORF-CD::upp為模闆PCR擴增CD::upp基因,錶達型質粒載體PMG-36e與自殺基因CD::upp分彆用限製性內切酶Sac Ⅰ與Sal Ⅰ進行雙酶切,T4DNA連接酶16℃恆溫水浴過夜連接,轉化入感受態JM109,篩選單剋隆提取重組質粒PMG-36e-CD::UPP進行1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,雙酶切鑒定,PCR鑒定,及測序鑒定.結果:重組質粒PMG-36e-CD::upp經1%瓊脂糖凝膠鑒定,分子量為5.5Kb,與其標準分子量大小一緻;重組質粒PMG-36e-CD::upp經雙酶切鑒定及PCR初步鑒定構建成功;送上海生物工程技術服務有限公司測序認證,同源性達100%.結論:重組質粒PMG-36e-CD::upp可成功構建,可用于後續實驗的錶達研究.
목적:탐토이용분자생물학기인중조기술구건PMG-36e-CD::upp자살기인중조질립적방법.방법:용소량제비질립DNA적방법분별제취표체형질립재체PMG-36e화자살기인pORF-CD::upp,이질립pORF-CD::upp위모판PCR확증CD::upp기인,표체형질립재체PMG-36e여자살기인CD::upp분별용한제성내절매Sac Ⅰ여Sal Ⅰ진행쌍매절,T4DNA련접매16℃항온수욕과야련접,전화입감수태JM109,사선단극륭제취중조질립PMG-36e-CD::UPP진행1%경지당응효전영감정,쌍매절감정,PCR감정,급측서감정.결과:중조질립PMG-36e-CD::upp경1%경지당응효감정,분자량위5.5Kb,여기표준분자량대소일치;중조질립PMG-36e-CD::upp경쌍매절감정급PCR초보감정구건성공;송상해생물공정기술복무유한공사측서인증,동원성체100%.결론:중조질립PMG-36e-CD::upp가성공구건,가용우후속실험적표체연구.
