动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2011年
1期
1-9
,共9页
黄律%龙进学%翟少伦%刘长龙%张荣%袁世山
黃律%龍進學%翟少倫%劉長龍%張榮%袁世山
황률%룡진학%적소륜%류장룡%장영%원세산
猪细小病毒4型%TaqMan荧光PCR%检测
豬細小病毒4型%TaqMan熒光PCR%檢測
저세소병독4형%TaqMan형광PCR%검측
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及TaqMan探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的TaqMan荧光定量PCR.反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL~6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL.特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性.批内及批间变异系数均低于2%.用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%.本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术.
根據GenBank中髮錶的豬細小病毒4型(PPV4)全基因組序列,針對其結構蛋白VP2基因的保守序列,設計閤成特異性引物及TaqMan探針,以VP2剋隆質粒為標準品,通過對探針濃度、引物濃度、dNTP濃度、鎂離子濃度以及退火溫度進行調整,建立瞭PPV4的TaqMan熒光定量PCR.反應條件優化後,該方法在6.73×109copies/μL~6.73×101copies/μL範圍內線性關繫良好,相關繫數為0.998;對PPV4的最低檢測限為6.73×101copies/μL.特異性試驗結果顯示,用該方法檢測其他基因型豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒、豬瘟病毒及豬圓環病毒2型等臨床常見病毒,結果均為陰性.批內及批間變異繫數均低于2%.用建立的熒光定量PCR方法和普通PCR方法對672份臨床病料感染情況進行檢測,暘性率為1.93%,而普通PCR檢齣率僅為1.63%.本研究首次報告在我國豬群中存在PPV4,同時建立的熒光定量方法為PPV4的檢測、體外敏感細胞的篩選以及病毒器官嗜性的研究等提供瞭快速而敏感的分子檢測技術.
근거GenBank중발표적저세소병독4형(PPV4)전기인조서렬,침대기결구단백VP2기인적보수서렬,설계합성특이성인물급TaqMan탐침,이VP2극륭질립위표준품,통과대탐침농도、인물농도、dNTP농도、미리자농도이급퇴화온도진행조정,건립료PPV4적TaqMan형광정량PCR.반응조건우화후,해방법재6.73×109copies/μL~6.73×101copies/μL범위내선성관계량호,상관계수위0.998;대PPV4적최저검측한위6.73×101copies/μL.특이성시험결과현시,용해방법검측기타기인형저세소병독、저번식여호흡종합정병독、저온병독급저원배병독2형등림상상견병독,결과균위음성.비내급비간변이계수균저우2%.용건립적형광정량PCR방법화보통PCR방법대672빈림상병료감염정황진행검측,양성솔위1.93%,이보통PCR검출솔부위1.63%.본연구수차보고재아국저군중존재PPV4,동시건립적형광정량방법위PPV4적검측、체외민감세포적사선이급병독기관기성적연구등제공료쾌속이민감적분자검측기술.