微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2012年
4期
1-5
,共5页
李睿%王革%钱秋娟%王秉翔
李睿%王革%錢鞦娟%王秉翔
리예%왕혁%전추연%왕병상
重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21%传代稳定性
重組大腸桿菌pET-28(a)/LF/BL21%傳代穩定性
중조대장간균pET-28(a)/LF/BL21%전대은정성
目的 通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性.方法 将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生化特性、质粒保有率、生长速度等的差异；取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA测序；诱导表达各代次菌株,比较各代次菌株的重组rLF蛋白的表达水平及免疫反应性.结果 各代次菌株菌落形态、生化特性、生长速度等方面与原始种子库无明显差异；在传至100代时的质粒保有率为76％；各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱未改变,未见lf基因变异；各代次菌株的总蛋白电泳图谱、rLF蛋白表达量、rLF蛋白的免疫反应性与原始种子库无明显差异.结论 重组大肠杆菌pET-28 (a)/LF/BL21具有较好的传代稳定性.
目的 通過菌株傳代方法觀察攜帶緻死因子(lf)基因的重組大腸桿菌pET-28(a)/LF/BL21的傳代穩定性.方法 將重組菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那黴素的LB培養基中連續傳代至100代,比較第1、10、20、50、100代菌株的菌落形態、細菌形態、生化特性、質粒保有率、生長速度等的差異；取各代次菌株提取質粒DNA且分彆進行雙酶切及PCR鑒定、DNA測序；誘導錶達各代次菌株,比較各代次菌株的重組rLF蛋白的錶達水平及免疫反應性.結果 各代次菌株菌落形態、生化特性、生長速度等方麵與原始種子庫無明顯差異；在傳至100代時的質粒保有率為76％；各代次菌株重組質粒電泳圖譜、酶切圖譜、PCR圖譜未改變,未見lf基因變異；各代次菌株的總蛋白電泳圖譜、rLF蛋白錶達量、rLF蛋白的免疫反應性與原始種子庫無明顯差異.結論 重組大腸桿菌pET-28 (a)/LF/BL21具有較好的傳代穩定性.
목적 통과균주전대방법관찰휴대치사인자(lf)기인적중조대장간균pET-28(a)/LF/BL21적전대은정성.방법 장중조균주pET-28(a)/LF/BL21재함유잡나매소적LB배양기중련속전대지100대,비교제1、10、20、50、100대균주적균락형태、세균형태、생화특성、질립보유솔、생장속도등적차이；취각대차균주제취질립DNA차분별진행쌍매절급PCR감정、DNA측서；유도표체각대차균주,비교각대차균주적중조rLF단백적표체수평급면역반응성.결과 각대차균주균락형태、생화특성、생장속도등방면여원시충자고무명현차이；재전지100대시적질립보유솔위76％；각대차균주중조질립전영도보、매절도보、PCR도보미개변,미견lf기인변이；각대차균주적총단백전영도보、rLF단백표체량、rLF단백적면역반응성여원시충자고무명현차이.결론 중조대장간균pET-28 (a)/LF/BL21구유교호적전대은정성.
