CAJ | 학술논문

本研究目的构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的慢病毒载体,并研究其对不同细胞系的淋巴瘤细胞的感染效率.采用分子克隆技术,将针对TRAIL基因mRNA的cDNA片段插入到克隆栽体pGM-T,构建pGM-T-TRAIL,然后将测序正确的TRAIL基因克隆至慢病毒表达载体pWPI,构建慢病毒表达载体pWPI-TRAIL.最后利用pWPI/VSV-G/△8.2慢病毒包装系统,通过转染293T细胞,制备重组慢病毒plenti-TRAIL,并进行浓缩和滴度测定.将重组慢病毒栽体感染不同来源的淋巴瘤细胞系,测定荧光表达评价感染效率,利用RT-PCR和Western blot法评价TRAIL基因的表达情况.结果表明,酶切鉴定及测序结果表明pGM -T-TRAIL和pWPI-TRAIL载体构建成功,滴度测定结果显示浓缩的重组慢病毒plenti-TRAIL浓度可达109 IU/ml.感染效率结果显示YTS细胞较DOHH2和Jurkat细胞更易被慢病毒感染(P＜0.05).RT-PCR和Western blot实验表明淋巴瘤细胞后plenti-TRAIL感染后可有效地表达TRAIL基因.结论:成功构建了慢病毒表达载体pWPI-TRAIL,并制备出重组慢病毒plenti-TRAIL.plenti-TRAIL可以有效感染不同细胞来源的淋巴瘤细胞系,同时感染后的淋巴瘤细胞可以有效表达TRAIL基因.
본연구목적구건휴대인종류배사인자상관조망유도배체(TRAIL)기인적만병독재체,병연구기대불동세포계적림파류세포적감염효솔.채용분자극륭기술,장침대TRAIL기인mRNA적cDNA편단삽입도극륭재체pGM-T,구건pGM-T-TRAIL,연후장측서정학적TRAIL기인극륭지만병독표체재체pWPI,구건만병독표체재체pWPI-TRAIL.최후이용pWPI/VSV-G/△8.2만병독포장계통,통과전염293T세포,제비중조만병독plenti-TRAIL,병진행농축화적도측정.장중조만병독재체감염불동래원적림파류세포계,측정형광표체평개감염효솔,이용RT-PCR화Western blot법평개TRAIL기인적표체정황.결과표명,매절감정급측서결과표명pGM -T-TRAIL화pWPI-TRAIL재체구건성공,적도측정결과현시농축적중조만병독plenti-TRAIL농도가체109 IU/ml.감염효솔결과현시YTS세포교DOHH2화Jurkat세포경역피만병독감염(P＜0.05).RT-PCR화Western blot실험표명림파류세포후plenti-TRAIL감염후가유효지표체TRAIL기인.결론:성공구건료만병독표체재체pWPI-TRAIL,병제비출중조만병독plenti-TRAIL.plenti-TRAIL가이유효감염불동세포래원적림파류세포계,동시감염후적림파류세포가이유효표체TRAIL기인.