医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2004年
1期
5-8
,共4页
王付勇%刘彦仿%苏勤%赵君%张静梅
王付勇%劉彥倣%囌勤%趙君%張靜梅
왕부용%류언방%소근%조군%장정매
牛蛙核糖核酸酶%大肠杆菌%克隆%表达
牛蛙覈糖覈痠酶%大腸桿菌%剋隆%錶達
우와핵당핵산매%대장간균%극륭%표체
目的:克隆牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase)基因,构建重组原核表达载体,利用大肠杆菌系统表达RC-RNase蛋白. 方法:采用RT-PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆RC-RNase基因,并进行序列测定;将RC-RNase基因插入到6×His表达载体pRSET-A中,构建成表达质粒pRSET-RC-RNase,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定. 结果:扩增出一条约380 bp的基因片段,双酶切鉴定和序列测定的数据与预期结果一致.经IPTG诱导,融合蛋白 (His)6- RC-RNase在大肠杆菌中得到成功表达,SDS-PAGE上出现相对分子质量约为16 000的一条新生蛋白带,经蛋白印迹验证为表达蛋白.薄层扫描显示,表达产物占菌体总蛋白的12.5%,主要以包涵体形式存在. 结论:正确克隆出RC-RNase基因,并在大肠杆菌中得到成功诱导表达,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了基础.
目的:剋隆牛蛙覈糖覈痠酶(RC-RNase)基因,構建重組原覈錶達載體,利用大腸桿菌繫統錶達RC-RNase蛋白. 方法:採用RT-PCR的方法從牛蛙肝髒中剋隆RC-RNase基因,併進行序列測定;將RC-RNase基因插入到6×His錶達載體pRSET-A中,構建成錶達質粒pRSET-RC-RNase,用異丙基巰基半乳糖(IPTG)在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,併以免疫印跡法對錶達蛋白進行鑒定. 結果:擴增齣一條約380 bp的基因片段,雙酶切鑒定和序列測定的數據與預期結果一緻.經IPTG誘導,融閤蛋白 (His)6- RC-RNase在大腸桿菌中得到成功錶達,SDS-PAGE上齣現相對分子質量約為16 000的一條新生蛋白帶,經蛋白印跡驗證為錶達蛋白.薄層掃描顯示,錶達產物佔菌體總蛋白的12.5%,主要以包涵體形式存在. 結論:正確剋隆齣RC-RNase基因,併在大腸桿菌中得到成功誘導錶達,為進一步研究其生物學特性和功能奠定瞭基礎.
목적:극륭우와핵당핵산매(RC-RNase)기인,구건중조원핵표체재체,이용대장간균계통표체RC-RNase단백. 방법:채용RT-PCR적방법종우와간장중극륭RC-RNase기인,병진행서렬측정;장RC-RNase기인삽입도6×His표체재체pRSET-A중,구건성표체질립pRSET-RC-RNase,용이병기구기반유당(IPTG)재대장간균BL21(DE3)중유도표체,병이면역인적법대표체단백진행감정. 결과:확증출일조약380 bp적기인편단,쌍매절감정화서렬측정적수거여예기결과일치.경IPTG유도,융합단백 (His)6- RC-RNase재대장간균중득도성공표체,SDS-PAGE상출현상대분자질량약위16 000적일조신생단백대,경단백인적험증위표체단백.박층소묘현시,표체산물점균체총단백적12.5%,주요이포함체형식존재. 결론:정학극륭출RC-RNase기인,병재대장간균중득도성공유도표체,위진일보연구기생물학특성화공능전정료기출.
