中华流行病学杂志
中華流行病學雜誌
중화류행병학잡지
CHINESE JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY
2006年
10期
889-893
,共5页
张强%唐青%刘卫滨%李浩%梁国栋
張彊%唐青%劉衛濱%李浩%樑國棟
장강%당청%류위빈%리호%량국동
狂犬病毒%TaqMan PCR检测%定量
狂犬病毒%TaqMan PCR檢測%定量
광견병독%TaqMan PCR검측%정량
目的 建立检测狂犬病毒(RV)核蛋白(N)基因片段的TaqMan PCR检测方法.方法 针对RV N基因保守区域设计特异性引物与探针;优化检测体系中引物与探针的浓度;以体外转录的RV完整的N基因RNA作为定量分析模型;考核检测体系灵敏性、特异性、稳定性;初步用于RV的检测.结果 引物和探针具有良好的特异性,使用浓度分别为0.6μmol/L和0.2μmol/L,可检测到2700个RNA拷贝数,较传统RT-PCR检测方法敏感性提高了10倍;同一样品Ct值重复检测5次,变异系数均＜5%,表明检测体系具有较好的稳定性;通过所建立的检测体系,绘制了以模板拷贝数为分析指标的RV定量检测标准曲线,对实验室内保存毒株的检测结果显示TaqMan PCR检测比普通PCR检测更快捷、敏感.结论 所建立的RV TaqMan PCR可以用于RV的实验室检测,并且比普通PCR检测方法更灵敏、特异.
目的 建立檢測狂犬病毒(RV)覈蛋白(N)基因片段的TaqMan PCR檢測方法.方法 針對RV N基因保守區域設計特異性引物與探針;優化檢測體繫中引物與探針的濃度;以體外轉錄的RV完整的N基因RNA作為定量分析模型;攷覈檢測體繫靈敏性、特異性、穩定性;初步用于RV的檢測.結果 引物和探針具有良好的特異性,使用濃度分彆為0.6μmol/L和0.2μmol/L,可檢測到2700箇RNA拷貝數,較傳統RT-PCR檢測方法敏感性提高瞭10倍;同一樣品Ct值重複檢測5次,變異繫數均＜5%,錶明檢測體繫具有較好的穩定性;通過所建立的檢測體繫,繪製瞭以模闆拷貝數為分析指標的RV定量檢測標準麯線,對實驗室內保存毒株的檢測結果顯示TaqMan PCR檢測比普通PCR檢測更快捷、敏感.結論 所建立的RV TaqMan PCR可以用于RV的實驗室檢測,併且比普通PCR檢測方法更靈敏、特異.
목적 건립검측광견병독(RV)핵단백(N)기인편단적TaqMan PCR검측방법.방법 침대RV N기인보수구역설계특이성인물여탐침;우화검측체계중인물여탐침적농도;이체외전록적RV완정적N기인RNA작위정량분석모형;고핵검측체계령민성、특이성、은정성;초보용우RV적검측.결과 인물화탐침구유량호적특이성,사용농도분별위0.6μmol/L화0.2μmol/L,가검측도2700개RNA고패수,교전통RT-PCR검측방법민감성제고료10배;동일양품Ct치중복검측5차,변이계수균＜5%,표명검측체계구유교호적은정성;통과소건립적검측체계,회제료이모판고패수위분석지표적RV정량검측표준곡선,대실험실내보존독주적검측결과현시TaqMan PCR검측비보통PCR검측경쾌첩、민감.결론 소건립적RV TaqMan PCR가이용우RV적실험실검측,병차비보통PCR검측방법경령민、특이.
