第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
12期
1111-1113
,共3页
郑钧丰%孔永%葛良鹏%魏泓
鄭鈞豐%孔永%葛良鵬%魏泓
정균봉%공영%갈량붕%위홍
腺相关病毒%人皮肤成纤维细胞%增强型绿色荧光蛋白%流式细胞
腺相關病毒%人皮膚成纖維細胞%增彊型綠色熒光蛋白%流式細胞
선상관병독%인피부성섬유세포%증강형록색형광단백%류식세포
目的 比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast, HFB)的转染效率.方法 原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of infection,MOI)为104、105、106转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的转染效率,倒置荧光显微镜观察转染后的荧光强度.MTT法检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的毒性.结果 腺相关病毒AAV2-EGFP对HFB的转染效率随着MOI增加而增高, MOI为104时转染效率为(7.68±1.18)%,当MOI达到105后,转染效率稳定在(22.16±5.59)%,随着MOI增加,最高至MOI 106转染效率无显著提高.而病毒AAV2/1对于HFB的转染效率在MOI 为106转染效率仅为(3.47±0.93)%.2种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异.结论 AAV2载体对体外培养的HFB转染效率高于AAV2/1,但2种病毒载体对人皮肤成纤维细胞转染效率均不高,AAV2/1-EGFP对HFB几乎无感染能力.
目的 比較2種不同腺相關病毒(adeno-associated virus, AAV)介導的增彊型綠色熒光蛋白對人皮膚成纖維細胞(human fibroblast, HFB)的轉染效率.方法 原代分離培養人皮膚成纖維細胞併鑒定,按照感染複數(multiple of infection,MOI)為104、105、106轉染傳2代的人成纖維細胞,流式細胞檢測AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP對HFB的轉染效率,倒置熒光顯微鏡觀察轉染後的熒光彊度.MTT法檢測AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP對HFB的毒性.結果 腺相關病毒AAV2-EGFP對HFB的轉染效率隨著MOI增加而增高, MOI為104時轉染效率為(7.68±1.18)%,噹MOI達到105後,轉染效率穩定在(22.16±5.59)%,隨著MOI增加,最高至MOI 106轉染效率無顯著提高.而病毒AAV2/1對于HFB的轉染效率在MOI 為106轉染效率僅為(3.47±0.93)%.2種病毒在轉染過程中,細胞生長正常,MTT顯示各轉染組與未轉染組的吸光度值無統計學差異.結論 AAV2載體對體外培養的HFB轉染效率高于AAV2/1,但2種病毒載體對人皮膚成纖維細胞轉染效率均不高,AAV2/1-EGFP對HFB幾乎無感染能力.
목적 비교2충불동선상관병독(adeno-associated virus, AAV)개도적증강형록색형광단백대인피부성섬유세포(human fibroblast, HFB)적전염효솔.방법 원대분리배양인피부성섬유세포병감정,안조감염복수(multiple of infection,MOI)위104、105、106전염전2대적인성섬유세포,류식세포검측AAV2-EGFP화AAV2/1-EGFP대HFB적전염효솔,도치형광현미경관찰전염후적형광강도.MTT법검측AAV2-EGFP화AAV2/1-EGFP대HFB적독성.결과 선상관병독AAV2-EGFP대HFB적전염효솔수착MOI증가이증고, MOI위104시전염효솔위(7.68±1.18)%,당MOI체도105후,전염효솔은정재(22.16±5.59)%,수착MOI증가,최고지MOI 106전염효솔무현저제고.이병독AAV2/1대우HFB적전염효솔재MOI 위106전염효솔부위(3.47±0.93)%.2충병독재전염과정중,세포생장정상,MTT현시각전염조여미전염조적흡광도치무통계학차이.결론 AAV2재체대체외배양적HFB전염효솔고우AAV2/1,단2충병독재체대인피부성섬유세포전염효솔균불고,AAV2/1-EGFP대HFB궤호무감염능력.
