CAJ | 학술논문

目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位.方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物.采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析.结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml.间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128 000、1:32 000、1:64 000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合.结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强.
목적 연구대인류면역결함병독Ⅰ형HXB2주조공단백Tat원핵표체산생영향적구역화Tat단백중요적항원표위.방법 용PCR방법획득Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)화Tat(38-101aa)DNA편단,구건기원핵표체질립pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)화pET32a-Tat(38-101aa),병전입E.coli BL21(DE3)중진행유도표체급순화,SDS-PAGE감정표체급순화산물.채용간접ELISA방법용토항pET32a-Tat항혈청대삼충태단진행면역원성분석.결과성공구건료pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)화pET32a-Tat(38-101aa)질립,분별표체출상대분자질량(Mr)위23×103、23×103화25×103적융합태단,기농도분별위4.26、3.35화5.11mg/ml.간접ELISA결과표명삼충융합태단여토항pET32a-Tat항혈청균정특이성결합반응,기항체적도분별위1:128 000、1:32 000、1:64 000,이항혈청여pET32a단백부유교약결합.결론반광안산부집구(22-37위안기산)대Tat단백적원핵표체유교현저영향;Tat단백적N단구、감성구화C단구시기중요적항원표위,기중N단구적면역원성최강.