复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2009年
2期
191-194,200
,共5页
徐江红%陈兵%章德广%郭建%顾凌澜
徐江紅%陳兵%章德廣%郭建%顧凌瀾
서강홍%진병%장덕엄%곽건%고릉란
肺炎链球菌%自溶素基因%克隆和表达
肺炎鏈毬菌%自溶素基因%剋隆和錶達
폐염련구균%자용소기인%극륭화표체
目的 克隆肺炎链球菌自溶素(LytA)基因并在大肠埃希菌中表达及蛋白纯化.方法 用PCR方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将其插入原核表达载体pET32a(+),构建pET32a(+)-LytA重组质粒,经IPTG诱导使该基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,亲和层析法纯化目的 蛋白,将获得的蛋白用Western blot 鉴定.结果 扩增出的DNA序列与GenBank中的LytA基因序列一致,成功构建了pET32a(+)-LytA重组质粒并在大肠埃希菌中高效表达,所表达的蛋白经Western blot证实为肺炎链球菌自溶素融合蛋白.结论 成功克隆了肺炎链球菌自溶素基因,并将其在大肠埃希菌中表达、纯化,为新型肺炎链球菌疫苗的研制奠定了基础.
目的 剋隆肺炎鏈毬菌自溶素(LytA)基因併在大腸埃希菌中錶達及蛋白純化.方法 用PCR方法從肺炎鏈毬菌基因組中剋隆肺炎鏈毬菌自溶素基因,然後將其插入原覈錶達載體pET32a(+),構建pET32a(+)-LytA重組質粒,經IPTG誘導使該基因在大腸埃希菌BL21(DE3)中錶達,親和層析法純化目的 蛋白,將穫得的蛋白用Western blot 鑒定.結果 擴增齣的DNA序列與GenBank中的LytA基因序列一緻,成功構建瞭pET32a(+)-LytA重組質粒併在大腸埃希菌中高效錶達,所錶達的蛋白經Western blot證實為肺炎鏈毬菌自溶素融閤蛋白.結論 成功剋隆瞭肺炎鏈毬菌自溶素基因,併將其在大腸埃希菌中錶達、純化,為新型肺炎鏈毬菌疫苗的研製奠定瞭基礎.
목적 극륭폐염련구균자용소(LytA)기인병재대장애희균중표체급단백순화.방법 용PCR방법종폐염련구균기인조중극륭폐염련구균자용소기인,연후장기삽입원핵표체재체pET32a(+),구건pET32a(+)-LytA중조질립,경IPTG유도사해기인재대장애희균BL21(DE3)중표체,친화층석법순화목적 단백,장획득적단백용Western blot 감정.결과 확증출적DNA서렬여GenBank중적LytA기인서렬일치,성공구건료pET32a(+)-LytA중조질립병재대장애희균중고효표체,소표체적단백경Western blot증실위폐염련구균자용소융합단백.결론 성공극륭료폐염련구균자용소기인,병장기재대장애희균중표체、순화,위신형폐염련구균역묘적연제전정료기출.
