CAJ | 학술논문

本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系.利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证.结果表明,经过加入标签的MinI-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.COliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株.这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础.
본연구이자살성질립pUT휴대함유신호표첨적Mini-Tn5전좌자대저흉막폐염방선간균혈청1형균진행전좌유변,구건료대유12대특이성신호표첨적Mini-Tn5전좌자적pUT자살질립,전화도공체균E.coliβ2155후,이용쌍친본려막잡교법여수체저흉막폐염방선간균혈청1형균(APP1)진행접합전이,구건병우화료접합전이체계.이용항성화영양결함배양평판사선득도접합돌변체,통과항성통용인물여12개특이표첨인물화흉막폐염방선간균독소IV(ApxIV)감정인물분별대저사돌변체진행료PCR감정화측서험증.결과표명,경과가입표첨적MinI-Tn5전좌자가이통과접합전이적방식종공체균E.COliβ2155중삽입도APP1기인조당중,병성공구건료12개함유특이신호표첨적중조질립,획득료APP1적12개전좌돌변체고,경사선감정후득도561개돌변주.저위연구APP1적공능기인화사선특정돌변주제공료필요적기출.