中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
40期
7931-7936
,共6页
骨髓间充质干细胞%心肌细胞%心肌裂解液%间接接触
骨髓間充質榦細胞%心肌細胞%心肌裂解液%間接接觸
골수간충질간세포%심기세포%심기렬해액%간접접촉
背景:研究显示干细胞有随环境发生分化即"环境依赖性分化"的特性,但骨髓间充质干细胞在心肌组织是否存在此种特性目前尚未形成公识.目的:观察化学诱导剂和模拟的生物微环境诱导对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响.设计、时间及地点:随机分组设计,细胞学体外对比观察,于2008-01/2009-02在苏州大学心血管内科干细胞移植实验室完成.材料:6～8周龄SD大鼠,用于骨髓间充质干细胞的培养;新生1～3 d同种系SD大鼠,用于心肌细胞的培养.方法:取SD大鼠股骨骨髓,培养至第2代,经流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞纯度97%以上,制成4×108L-1的细胞悬液,实验分为4组:单纯DMEM培养组:用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基继续培养;5-氮杂胞苷组:24 h后培养液内加入10 μmol/L的5-氮杂胞苷;心肌细胞裂解液组:将4倍于骨髓间充质干细胞数量的心肌细胞裂解液加入骨髓间充质干细胞培养瓶中;间接接触组:在培养体系中放入millicell插入式细胞培养皿,28 d收获细胞.主要观察指标:免疫组织化学法检测诱导后骨髓间充质干细胞表达心肌特异性肌钙蛋白T、连接蛋白43、CD31的情况;RT-PCR法检测各组早期心肌细胞特异性转录因子GATA4、NKX2.5、β-肌球蛋白重链及α-肌球蛋白重链基因的表达情况.结果:免疫组织化学检测显示实验组诱导4周后特异性抗原呈阳性表达,实验组与单纯DMEM培养组相比,差异有显著性意义(P<0.05);间接接触组较心肌细胞裂解液组阳性细胞数目稍增多,但组间差异无显著性意义(P>0.05);CD31是血管内皮细胞的表面抗原标志,单纯DMEM培养组和5-氮杂胞苷组无表达,其他两组弱阳性表达,组间差异无显著性意义(P>0.05).实验组诱导4周后,均表达心肌前体细胞特异性转录因子NKX-2.5和GATA4,同时表达胚胎期占优势的心肌细胞特异性β-肌球蛋白重链,而没有表达成年期占优势的心肌细胞特异性标志α-肌球蛋白重链.结论:5-氮杂胞苷可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,心肌细胞裂解液和细胞间接接触模拟的心肌微环境也可以诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞,分化的细胞介于成熟的心肌细胞和心肌祖细胞之间的心肌细胞前体.
揹景:研究顯示榦細胞有隨環境髮生分化即"環境依賴性分化"的特性,但骨髓間充質榦細胞在心肌組織是否存在此種特性目前尚未形成公識.目的:觀察化學誘導劑和模擬的生物微環境誘導對骨髓間充質榦細胞嚮心肌樣細胞分化的影響.設計、時間及地點:隨機分組設計,細胞學體外對比觀察,于2008-01/2009-02在囌州大學心血管內科榦細胞移植實驗室完成.材料:6～8週齡SD大鼠,用于骨髓間充質榦細胞的培養;新生1～3 d同種繫SD大鼠,用于心肌細胞的培養.方法:取SD大鼠股骨骨髓,培養至第2代,經流式細胞儀檢測骨髓間充質榦細胞純度97%以上,製成4×108L-1的細胞懸液,實驗分為4組:單純DMEM培養組:用含體積分數為10%胎牛血清的DMEM培養基繼續培養;5-氮雜胞苷組:24 h後培養液內加入10 μmol/L的5-氮雜胞苷;心肌細胞裂解液組:將4倍于骨髓間充質榦細胞數量的心肌細胞裂解液加入骨髓間充質榦細胞培養瓶中;間接接觸組:在培養體繫中放入millicell插入式細胞培養皿,28 d收穫細胞.主要觀察指標:免疫組織化學法檢測誘導後骨髓間充質榦細胞錶達心肌特異性肌鈣蛋白T、連接蛋白43、CD31的情況;RT-PCR法檢測各組早期心肌細胞特異性轉錄因子GATA4、NKX2.5、β-肌毬蛋白重鏈及α-肌毬蛋白重鏈基因的錶達情況.結果:免疫組織化學檢測顯示實驗組誘導4週後特異性抗原呈暘性錶達,實驗組與單純DMEM培養組相比,差異有顯著性意義(P<0.05);間接接觸組較心肌細胞裂解液組暘性細胞數目稍增多,但組間差異無顯著性意義(P>0.05);CD31是血管內皮細胞的錶麵抗原標誌,單純DMEM培養組和5-氮雜胞苷組無錶達,其他兩組弱暘性錶達,組間差異無顯著性意義(P>0.05).實驗組誘導4週後,均錶達心肌前體細胞特異性轉錄因子NKX-2.5和GATA4,同時錶達胚胎期佔優勢的心肌細胞特異性β-肌毬蛋白重鏈,而沒有錶達成年期佔優勢的心肌細胞特異性標誌α-肌毬蛋白重鏈.結論:5-氮雜胞苷可以誘導骨髓間充質榦細胞嚮心肌樣細胞分化,心肌細胞裂解液和細胞間接接觸模擬的心肌微環境也可以誘導骨髓間充質榦細胞分化成心肌樣細胞,分化的細胞介于成熟的心肌細胞和心肌祖細胞之間的心肌細胞前體.
배경:연구현시간세포유수배경발생분화즉"배경의뢰성분화"적특성,단골수간충질간세포재심기조직시부존재차충특성목전상미형성공식.목적:관찰화학유도제화모의적생물미배경유도대골수간충질간세포향심기양세포분화적영향.설계、시간급지점:수궤분조설계,세포학체외대비관찰,우2008-01/2009-02재소주대학심혈관내과간세포이식실험실완성.재료:6～8주령SD대서,용우골수간충질간세포적배양;신생1～3 d동충계SD대서,용우심기세포적배양.방법:취SD대서고골골수,배양지제2대,경류식세포의검측골수간충질간세포순도97%이상,제성4×108L-1적세포현액,실험분위4조:단순DMEM배양조:용함체적분수위10%태우혈청적DMEM배양기계속배양;5-담잡포감조:24 h후배양액내가입10 μmol/L적5-담잡포감;심기세포렬해액조:장4배우골수간충질간세포수량적심기세포렬해액가입골수간충질간세포배양병중;간접접촉조:재배양체계중방입millicell삽입식세포배양명,28 d수획세포.주요관찰지표:면역조직화학법검측유도후골수간충질간세포표체심기특이성기개단백T、련접단백43、CD31적정황;RT-PCR법검측각조조기심기세포특이성전록인자GATA4、NKX2.5、β-기구단백중련급α-기구단백중련기인적표체정황.결과:면역조직화학검측현시실험조유도4주후특이성항원정양성표체,실험조여단순DMEM배양조상비,차이유현저성의의(P<0.05);간접접촉조교심기세포렬해액조양성세포수목초증다,단조간차이무현저성의의(P>0.05);CD31시혈관내피세포적표면항원표지,단순DMEM배양조화5-담잡포감조무표체,기타량조약양성표체,조간차이무현저성의의(P>0.05).실험조유도4주후,균표체심기전체세포특이성전록인자NKX-2.5화GATA4,동시표체배태기점우세적심기세포특이성β-기구단백중련,이몰유표체성년기점우세적심기세포특이성표지α-기구단백중련.결론:5-담잡포감가이유도골수간충질간세포향심기양세포분화,심기세포렬해액화세포간접접촉모의적심기미배경야가이유도골수간충질간세포분화성심기양세포,분화적세포개우성숙적심기세포화심기조세포지간적심기세포전체.
