CAJ | 학술논문

构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对动员外周血CD34+细胞的体外扩增作用.克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体.转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.RBP-j报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性.磁珠分选动员外周血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合SCF、FL、TPO孵育一周,观察体外扩增作用.结果表明:成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白.配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-j报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路.此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用.我们成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础.
구건pET32a(+)-hDll1DSL원핵표체재체,표체、순화hDll1DSL단백,관찰기대동원외주혈CD34+세포적체외확증작용.극륭hDll1DSL,구건pET32a(+)-hDll1DSL중조표체재체.전화대장간균BL21,IPTG유도단백표체,얼주친합층석순화단백.RBP-j보고기인실험급Notch하유분자Hes1검측증실hDll1DSL활성.자주분선동원외주혈CD34+세포,가입hDll1DSL혹연합SCF、FL、TPO부육일주,관찰체외확증작용.결과표명:성공극륭hDll1DSL,병구건료pET32a(+)-hDll1DSL중조표체재체.재대장간균BL21성공표체Trx-hDll1DSL융합단백,경얼주친합층석순화단백,성공획득고순도적Trx-hDll1DSL융합단백.배체활성실험현시,가용성적Trx-hDll1DSL단백가이격활RBP-j보고기인,병차능상조Notch하유분자Hes1적표체,증명기능구격활Notch신호통로.차외,Trx-hDll1DSL융합단백여SCF、FL급TPO련용,구유협동자격CD34+세포체외확증적작용.아문성공구건료pET32a(+)-hDll1DSL중조표체재체,표체、순화료구유생물학활성적Trx-hDll1DSL융합단백,구유협동자격CD34+세포체외확증적작용,위조혈간/조세포체외확증체계적우화연구전정료기출.