中华显微外科杂志
中華顯微外科雜誌
중화현미외과잡지
Chinese Journal of Microsurgery
2007年
1期
32-34,插3
,共4页
施永彦%喻爱喜%张功礼%余永桂%江良波
施永彥%喻愛喜%張功禮%餘永桂%江良波
시영언%유애희%장공례%여영계%강량파
骨髓间充质干细胞%组织工程%神经生长因子
骨髓間充質榦細胞%組織工程%神經生長因子
골수간충질간세포%조직공정%신경생장인자
目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的体外构建表达神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的能力,同时使MSCs被绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)稳定标记,通过病毒载体将NGF和GFP基因高效转染到MSCs中. 方法 取2月龄100~150 g Wistar大鼠,全骨髓法分离培养纯化大鼠MSCs,利用携带人NGFB基因的修复缺陷性重组腺病毒(Ad-hNGFβ)和携带GFP基因的复制缺陷性逆转录病毒(Rt-GFP)转染MSCs,荧光显微镜观察GFP阳性的MSCs,免疫细胞化学和Western-blot检测hNGFβ的表达. 结果 Rt-GFP转染后,80%~90%MSCs可激发出明亮的绿色荧光,且荧光不随培养时间延长和传代次数增加而衰减.Ad-hNGFβ的转染MSCs中hNGFβ阳性率(90.17±2.14)显著高于阴性对照组(2.17±0.75)和空白对照组(1.83±0.98,P<0.01),转染后MSCs中NGFβ表达量(188.67±8.71)显著高于阴性对照组(25.67±4.08)和空白对照组(27.50±3.33,P<0.01). 结论 大鼠间充质干细胞的体外构建中Ad-hNGFβ可以高效转染MSCs,实现NGF在MSCs中高效表达,Rt-GFP可以使MSCs获得长效标记.
目的 探討骨髓間充質榦細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的體外構建錶達神經生長因子(nerve growth factor,NGF)的能力,同時使MSCs被綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)穩定標記,通過病毒載體將NGF和GFP基因高效轉染到MSCs中. 方法 取2月齡100~150 g Wistar大鼠,全骨髓法分離培養純化大鼠MSCs,利用攜帶人NGFB基因的脩複缺陷性重組腺病毒(Ad-hNGFβ)和攜帶GFP基因的複製缺陷性逆轉錄病毒(Rt-GFP)轉染MSCs,熒光顯微鏡觀察GFP暘性的MSCs,免疫細胞化學和Western-blot檢測hNGFβ的錶達. 結果 Rt-GFP轉染後,80%~90%MSCs可激髮齣明亮的綠色熒光,且熒光不隨培養時間延長和傳代次數增加而衰減.Ad-hNGFβ的轉染MSCs中hNGFβ暘性率(90.17±2.14)顯著高于陰性對照組(2.17±0.75)和空白對照組(1.83±0.98,P<0.01),轉染後MSCs中NGFβ錶達量(188.67±8.71)顯著高于陰性對照組(25.67±4.08)和空白對照組(27.50±3.33,P<0.01). 結論 大鼠間充質榦細胞的體外構建中Ad-hNGFβ可以高效轉染MSCs,實現NGF在MSCs中高效錶達,Rt-GFP可以使MSCs穫得長效標記.
목적 탐토골수간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSCs)적체외구건표체신경생장인자(nerve growth factor,NGF)적능력,동시사MSCs피록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)은정표기,통과병독재체장NGF화GFP기인고효전염도MSCs중. 방법 취2월령100~150 g Wistar대서,전골수법분리배양순화대서MSCs,이용휴대인NGFB기인적수복결함성중조선병독(Ad-hNGFβ)화휴대GFP기인적복제결함성역전록병독(Rt-GFP)전염MSCs,형광현미경관찰GFP양성적MSCs,면역세포화학화Western-blot검측hNGFβ적표체. 결과 Rt-GFP전염후,80%~90%MSCs가격발출명량적록색형광,차형광불수배양시간연장화전대차수증가이쇠감.Ad-hNGFβ적전염MSCs중hNGFβ양성솔(90.17±2.14)현저고우음성대조조(2.17±0.75)화공백대조조(1.83±0.98,P<0.01),전염후MSCs중NGFβ표체량(188.67±8.71)현저고우음성대조조(25.67±4.08)화공백대조조(27.50±3.33,P<0.01). 결론 대서간충질간세포적체외구건중Ad-hNGFβ가이고효전염MSCs,실현NGF재MSCs중고효표체,Rt-GFP가이사MSCs획득장효표기.