CAJ | 학술논문

目的探索用风湿性心脏病患者噬菌体表达文库构建和免疫筛选方法来研究风湿性心脏病的自身抗原候选分子.方法提取风湿性瓣膜性心脏病患者心肌组织总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成长链cDNA,用噬菌体载体构建表达文库,用风湿热患者血清免疫筛选该库,对筛选获得的自身抗原基因进行鉴定、生物信息学分析、体外表达、Western blotting鉴定和免疫反应结合性分析.结果成功构建了风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/ml,重组率为99%,81%外源片段大于1 kb.通过免疫筛选方法获得了自身抗原RHDAG1,该自身抗原与人类角蛋白18同源,能与活动性风湿热患者血清和风湿性心脏病患者血清结合,而与体检健康人血清无结合.结论构建噬菌体展示文库方法可以有效地用于筛选和获得风湿性心脏病患者自身抗原;本研究提示自身抗原RHDAG1可成为风湿热和威风心病的候选分子标志物.
목적 탐색용풍습성심장병환자서균체표체문고구건화면역사선방법래연구풍습성심장병적자신항원후선분자.방법 제취풍습성판막성심장병환자심기조직총RNA,분리순화mRNA병역전록합성장련cDNA,용서균체재체구건표체문고,용풍습열환자혈청면역사선해고,대사선획득적자신항원기인진행감정、생물신식학분석、체외표체、Western blotting감정화면역반응결합성분석.결과 성공구건료풍습성심장병환자심장조직서균체표체문고,원시문고적도위3.3×106pfu/ml,중조솔위99%,81%외원편단대우1 kb.통과면역사선방법획득료자신항원RHDAG1,해자신항원여인류각단백18동원,능여활동성풍습열환자혈청화풍습성심장병환자혈청결합,이여체검건강인혈청무결합.결론 구건서균체전시문고방법가이유효지용우사선화획득풍습성심장병환자자신항원;본연구제시자신항원RHDAG1가성위풍습열화위풍심병적후선분자표지물.