中国寄生虫病防治杂志
中國寄生蟲病防治雜誌
중국기생충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITIC DISEASE CONTROL
2005年
2期
88-91
,共4页
周怀瑜%何深一%丛华%古钦民%李瑛%赵群力%杨婷婷%张加勤
週懷瑜%何深一%叢華%古欽民%李瑛%趙群力%楊婷婷%張加勤
주부유%하심일%총화%고흠민%리영%조군력%양정정%장가근
刚地弓形虫%P30%免疫佐剂CTA2/B%基因克隆%酵母表达载体%生物信息学
剛地弓形蟲%P30%免疫佐劑CTA2/B%基因剋隆%酵母錶達載體%生物信息學
강지궁형충%P30%면역좌제CTA2/B%기인극륭%효모표체재체%생물신식학
目的构建含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B 复合基因的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组P30-CTX 蛋白奠定基础. 方法 PCR 扩增P30-CTX 复合基因,产物回收后与pMD-18T 载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,经氨苄抗性筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-P30-CTX;克隆载体与表达载体双酶切后,回收1 313 bp 的P30-CTX 基因,亚克隆入酵母表达载体,转化大肠埃希菌DH5α,筛选、测序后建立酵母表达载体PGAPZαA-P30-CTX.重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定.使用生物信息软件分析P30-CTX 复合基因,预测编码蛋白结构.结果重组质粒经PCR 可得1 313 bp 的特异条带,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切获得1 313 bp和3 085 bp的条带,与预期大小一致,测序结果证实为pGAP-P30-CTX 基因,序列分析同源性为99.82%,P30-CTX蛋白结构折叠无明显改变. 结论成功构建了含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B 复合基因的克隆载体及酵母表达载体,预测毕赤酵母表达系统对P30-CTX 的抗原性不会产生影响.
目的構建含有弓形蟲主要錶麵抗原P30與免疫佐劑CTA2/B 複閤基因的剋隆載體及酵母錶達載體,為進一步真覈錶達重組P30-CTX 蛋白奠定基礎. 方法 PCR 擴增P30-CTX 複閤基因,產物迴收後與pMD-18T 載體連接,轉化大腸埃希菌DH5α,經氨芐抗性篩選及測序,建立剋隆載體pMD18T-P30-CTX;剋隆載體與錶達載體雙酶切後,迴收1 313 bp 的P30-CTX 基因,亞剋隆入酵母錶達載體,轉化大腸埃希菌DH5α,篩選、測序後建立酵母錶達載體PGAPZαA-P30-CTX.重組質粒分彆以PCR、酶切及測序鑒定.使用生物信息軟件分析P30-CTX 複閤基因,預測編碼蛋白結構.結果重組質粒經PCR 可得1 313 bp 的特異條帶,EcoRⅠ、XbaⅠ雙酶切穫得1 313 bp和3 085 bp的條帶,與預期大小一緻,測序結果證實為pGAP-P30-CTX 基因,序列分析同源性為99.82%,P30-CTX蛋白結構摺疊無明顯改變. 結論成功構建瞭含有弓形蟲主要錶麵抗原P30與免疫佐劑CTA2/B 複閤基因的剋隆載體及酵母錶達載體,預測畢赤酵母錶達繫統對P30-CTX 的抗原性不會產生影響.
목적구건함유궁형충주요표면항원P30여면역좌제CTA2/B 복합기인적극륭재체급효모표체재체,위진일보진핵표체중조P30-CTX 단백전정기출. 방법 PCR 확증P30-CTX 복합기인,산물회수후여pMD-18T 재체련접,전화대장애희균DH5α,경안변항성사선급측서,건립극륭재체pMD18T-P30-CTX;극륭재체여표체재체쌍매절후,회수1 313 bp 적P30-CTX 기인,아극륭입효모표체재체,전화대장애희균DH5α,사선、측서후건립효모표체재체PGAPZαA-P30-CTX.중조질립분별이PCR、매절급측서감정.사용생물신식연건분석P30-CTX 복합기인,예측편마단백결구.결과중조질립경PCR 가득1 313 bp 적특이조대,EcoRⅠ、XbaⅠ쌍매절획득1 313 bp화3 085 bp적조대,여예기대소일치,측서결과증실위pGAP-P30-CTX 기인,서렬분석동원성위99.82%,P30-CTX단백결구절첩무명현개변. 결론성공구건료함유궁형충주요표면항원P30여면역좌제CTA2/B 복합기인적극륭재체급효모표체재체,예측필적효모표체계통대P30-CTX 적항원성불회산생영향.
