中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2005年
4期
476-481
,共6页
金美芳%丁向明%仇灏%吴士良%周嘉梁%郭向红%潘浩
金美芳%丁嚮明%仇灝%吳士良%週嘉樑%郭嚮紅%潘浩
금미방%정향명%구호%오사량%주가량%곽향홍%반호
多肽:Ⅳ-乙酰氨基半乳糖转移酶%融合表达%谷胱甘肽S-转移酶亲和柱%蛋白印迹%蓖麻蛋白样结构域%结构模拟
多肽:Ⅳ-乙酰氨基半乳糖轉移酶%融閤錶達%穀胱甘肽S-轉移酶親和柱%蛋白印跡%蓖痳蛋白樣結構域%結構模擬
다태:Ⅳ-을선안기반유당전이매%융합표체%곡광감태S-전이매친화주%단백인적%비마단백양결구역%결구모의
多肽:Ⅳ-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)是催化O-糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶活测定.为进一步研究其功能还在结构研究上利用网络结构模拟SWISS-MODEL服务器对ppGalNAc-T2的蓖麻蛋白样结构域进行结构模拟.成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1/T2,获得有效表达和纯化,并初步鉴定了其活性,同时预测了其可能的三维结构和活性位点.
多肽:Ⅳ-乙酰氨基半乳糖轉移酶(ppGalNAc-T)是催化O-糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起著關鍵的作用.為更好地研究該傢族酶的結構與功能,採用PCR技術從pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全長編碼序列,亞剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-1,轉化大腸桿菌BL21,穫得相應錶達產物,用穀胱甘肽S-轉移酶(GST)親和層析柱進行純化,併進行瞭Western印跡檢測和初步的酶活測定.為進一步研究其功能還在結構研究上利用網絡結構模擬SWISS-MODEL服務器對ppGalNAc-T2的蓖痳蛋白樣結構域進行結構模擬.成功構建瞭原覈錶達載體pGEX-4T-1/T2,穫得有效錶達和純化,併初步鑒定瞭其活性,同時預測瞭其可能的三維結構和活性位點.
다태:Ⅳ-을선안기반유당전이매(ppGalNAc-T)시최화O-당기화적기시매,재O취당적형성중기착관건적작용.위경호지연구해가족매적결구여공능,채용PCR기술종pDONR201-T2득도ppGalNAc-T2전장편마서렬,아극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1,전화대장간균BL21,획득상응표체산물,용곡광감태S-전이매(GST)친화층석주진행순화,병진행료Western인적검측화초보적매활측정.위진일보연구기공능환재결구연구상이용망락결구모의SWISS-MODEL복무기대ppGalNAc-T2적비마단백양결구역진행결구모의.성공구건료원핵표체재체pGEX-4T-1/T2,획득유효표체화순화,병초보감정료기활성,동시예측료기가능적삼유결구화활성위점.
