南方水产
南方水產
남방수산
SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE
2006年
6期
8-12
,共5页
邵艳卿%张殿昌%苏天凤%吕俊霖%江世贵
邵豔卿%張殿昌%囌天鳳%呂俊霖%江世貴
소염경%장전창%소천봉%려준림%강세귀
cDNA文库%浅色黄姑鱼%脑垂体
cDNA文庫%淺色黃姑魚%腦垂體
cDNA문고%천색황고어%뇌수체
以浅色黄姑鱼脑垂体为材料,应用SMARTTM cDNA library construction技术,构建以真核表达载体pcDNA3.1 ( + ) 为基础的浅色黄姑鱼cDNA文库.利用含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一链,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD PCR引物合成双链cDNA,双链cDNA用SfiⅠ酶切和过柱分级分离后,与引入SfiⅠ酶切位点的pcDNA3.1 ( + ) -Sfi I载体进行连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建成脑垂体全长cDNA文库.经过质量鉴定,得到的原始cDNA文库含有约1×105个重组子,重组率为90%,插入cDNA片段长度范围约为0.4～3 kb.研究为深入开展浅色黄姑鱼的生长发育相关基因的研究奠定了良好的基础.
以淺色黃姑魚腦垂體為材料,應用SMARTTM cDNA library construction技術,構建以真覈錶達載體pcDNA3.1 ( + ) 為基礎的淺色黃姑魚cDNA文庫.利用含SfiⅠB酶切位點的oligo(dT)引物閤成cDNA第一鏈,利用含SfiⅠA酶切位點的SMART覈苷痠作為cDNA第一鏈在mRNA5′耑延伸齣去的模闆,採用LD PCR引物閤成雙鏈cDNA,雙鏈cDNA用SfiⅠ酶切和過柱分級分離後,與引入SfiⅠ酶切位點的pcDNA3.1 ( + ) -Sfi I載體進行連接,轉化大腸桿菌TOP10感受態細胞,構建成腦垂體全長cDNA文庫.經過質量鑒定,得到的原始cDNA文庫含有約1×105箇重組子,重組率為90%,插入cDNA片段長度範圍約為0.4～3 kb.研究為深入開展淺色黃姑魚的生長髮育相關基因的研究奠定瞭良好的基礎.
이천색황고어뇌수체위재료,응용SMARTTM cDNA library construction기술,구건이진핵표체재체pcDNA3.1 ( + ) 위기출적천색황고어cDNA문고.이용함SfiⅠB매절위점적oligo(dT)인물합성cDNA제일련,이용함SfiⅠA매절위점적SMART핵감산작위cDNA제일련재mRNA5′단연신출거적모판,채용LD PCR인물합성쌍련cDNA,쌍련cDNA용SfiⅠ매절화과주분급분리후,여인입SfiⅠ매절위점적pcDNA3.1 ( + ) -Sfi I재체진행련접,전화대장간균TOP10감수태세포,구건성뇌수체전장cDNA문고.경과질량감정,득도적원시cDNA문고함유약1×105개중조자,중조솔위90%,삽입cDNA편단장도범위약위0.4～3 kb.연구위심입개전천색황고어적생장발육상관기인적연구전정료량호적기출.
