中国循证儿科杂志
中國循證兒科雜誌
중국순증인과잡지
CHINESE JOURNAL OF EVIDENCE-BASED PEDIATRICS
2009年
5期
436-441
,共6页
董慧瑾%钱渊%张又%陈冬梅%赵林清%刘立颖
董慧瑾%錢淵%張又%陳鼕梅%趙林清%劉立穎
동혜근%전연%장우%진동매%조림청%류립영
A组人轮状病毒%地高辛%斑点杂交%G基因型
A組人輪狀病毒%地高辛%斑點雜交%G基因型
A조인륜상병독%지고신%반점잡교%G기인형
目的 建立一种更加简便的A组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查.方法 在HRV VP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV 5种常见型别(G1～4,G9型)的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT-PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析.结果 建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10 pg.200份PAGE阳性标本中162份RT-RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9 %),G9型35例(21.6%),混合感染19例(11.7%),杂交未分出型2例(1.2%),未检测到G4型HRV.结论 本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用.通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染.
目的 建立一種更加簡便的A組人輪狀病毒(HRV)覈痠斑點雜交VP7分型方法,以便用于對HRV流行情況進行調查.方法 在HRV VP7編碼基因各G基因型間高度變異而型內高度保守區域設計分型探針,在該區域的兩側相對保守區域設計一對通用引物,利用PCR分彆將地高辛標記HRV 5種常見型彆(G1～4,G9型)的DNA探針,建立基于VP7的斑點雜交方法;選取經抗原檢測和聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢測均為HRV暘性的2006至2008年住院腹瀉患兒糞便標本200份,RT-PCR擴增VP7全基因,併對擴增暘性產物應用斑點雜交方法進行G型彆分析.結果 建立的斑點雜交方法在5種型彆探針間無交扠反應,各型探針的檢測靈敏度可達到10 pg.200份PAGE暘性標本中162份RT-RCR擴增VP7基因暘性,斑點雜交顯示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9 %),G9型35例(21.6%),混閤感染19例(11.7%),雜交未分齣型2例(1.2%),未檢測到G4型HRV.結論 本研究所建立的斑點雜交方法敏感度和特異度彊,適閤在HRV大規模分子流行病學調查時應用.通過該方法的初步應用,髮現北京地區嬰幼兒HRV除瞭常見的G1、G2和G3型外,還有G9型感染.
목적 건립일충경가간편적A조인륜상병독(HRV)핵산반점잡교VP7분형방법,이편용우대HRV류행정황진행조사.방법 재HRV VP7편마기인각G기인형간고도변이이형내고도보수구역설계분형탐침,재해구역적량측상대보수구역설계일대통용인물,이용PCR분별장지고신표기HRV 5충상견형별(G1～4,G9형)적DNA탐침,건립기우VP7적반점잡교방법;선취경항원검측화취병희선알응효전영(PAGE)검측균위HRV양성적2006지2008년주원복사환인분편표본200빈,RT-PCR확증VP7전기인,병대확증양성산물응용반점잡교방법진행G형별분석.결과 건립적반점잡교방법재5충형별탐침간무교차반응,각형탐침적검측령민도가체도10 pg.200빈PAGE양성표본중162빈RT-RCR확증VP7기인양성,반점잡교현시G1형41례(25.3%),G2형2례(1.2%),G3형63례(38.9 %),G9형35례(21.6%),혼합감염19례(11.7%),잡교미분출형2례(1.2%),미검측도G4형HRV.결론 본연구소건립적반점잡교방법민감도화특이도강,괄합재HRV대규모분자류행병학조사시응용.통과해방법적초보응용,발현북경지구영유인HRV제료상견적G1、G2화G3형외,환유G9형감염.
