中国血液流变学杂志
中國血液流變學雜誌
중국혈액류변학잡지
CHINESE JOURNAL OF HEMORHEOLOGY
2010年
2期
187-191,202
,共6页
杨润琳%范俊%罗世能%李文新
楊潤琳%範俊%囉世能%李文新
양윤림%범준%라세능%리문신
IL-15%蛋白纯化%包涵体复性%IL-15Rα,协同作用
IL-15%蛋白純化%包涵體複性%IL-15Rα,協同作用
IL-15%단백순화%포함체복성%IL-15Rα,협동작용
目的 原核表达小鼠白细胞介素-15(mouse interleukin 15,mIL-15),并初步研究其与受体α亚单位(mIL-15Rα)的协同效应.方法 从小鼠肾脏组织克隆mIL-15成熟肽部分的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pQE-30,所得重组表达质粒pQE-30/mIL-15转化E.coli M15.得到的转化子经IPTG诱导后获得重组表达产物,并进行SDS-PAGE和Western Blot检测.Ni-NTA亲和层析柱上纯化、复性重组蛋白,以获得成熟的mIL-15.采用MTT法检测重组mIL-15促CTLL-2细胞增殖的生物学活性,并进一步研究mIL-15与mIL-15Rα结合后协同促进靶细胞增殖的功能.结果 重组mIL-15主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约为14ku,并能为抗His和抗mIL-15抗体所特异性识别.经Ni-NTA柱上蛋白纯化、包涵体复性后,可得到纯度约为95%的成熟蛋白.成熟mIL-15能够促进CTLL-2细胞增殖,并具有明显的量效关系;并且,在mIL-15Rα的配合下,mIL-15的促CTLL-2细胞增殖的活性显著增强,尤其是在低mIL-15浓度条件下该协同作用表现得愈发明显.结论 获得了具有生物活性重组mIL-15,并初步研究了其与mIL-15Rα组成复合物的体外协同效应.该研究成果为进一步研究IL-15 及IL-15Rα协同性的作用机理和开展小鼠成体免疫治疗研究奠定了基础.
目的 原覈錶達小鼠白細胞介素-15(mouse interleukin 15,mIL-15),併初步研究其與受體α亞單位(mIL-15Rα)的協同效應.方法 從小鼠腎髒組織剋隆mIL-15成熟肽部分的基因片段,併亞剋隆至原覈錶達載體pQE-30,所得重組錶達質粒pQE-30/mIL-15轉化E.coli M15.得到的轉化子經IPTG誘導後穫得重組錶達產物,併進行SDS-PAGE和Western Blot檢測.Ni-NTA親和層析柱上純化、複性重組蛋白,以穫得成熟的mIL-15.採用MTT法檢測重組mIL-15促CTLL-2細胞增殖的生物學活性,併進一步研究mIL-15與mIL-15Rα結閤後協同促進靶細胞增殖的功能.結果 重組mIL-15主要以包涵體形式存在,其相對分子質量約為14ku,併能為抗His和抗mIL-15抗體所特異性識彆.經Ni-NTA柱上蛋白純化、包涵體複性後,可得到純度約為95%的成熟蛋白.成熟mIL-15能夠促進CTLL-2細胞增殖,併具有明顯的量效關繫;併且,在mIL-15Rα的配閤下,mIL-15的促CTLL-2細胞增殖的活性顯著增彊,尤其是在低mIL-15濃度條件下該協同作用錶現得愈髮明顯.結論 穫得瞭具有生物活性重組mIL-15,併初步研究瞭其與mIL-15Rα組成複閤物的體外協同效應.該研究成果為進一步研究IL-15 及IL-15Rα協同性的作用機理和開展小鼠成體免疫治療研究奠定瞭基礎.
목적 원핵표체소서백세포개소-15(mouse interleukin 15,mIL-15),병초보연구기여수체α아단위(mIL-15Rα)적협동효응.방법 종소서신장조직극륭mIL-15성숙태부분적기인편단,병아극륭지원핵표체재체pQE-30,소득중조표체질립pQE-30/mIL-15전화E.coli M15.득도적전화자경IPTG유도후획득중조표체산물,병진행SDS-PAGE화Western Blot검측.Ni-NTA친화층석주상순화、복성중조단백,이획득성숙적mIL-15.채용MTT법검측중조mIL-15촉CTLL-2세포증식적생물학활성,병진일보연구mIL-15여mIL-15Rα결합후협동촉진파세포증식적공능.결과 중조mIL-15주요이포함체형식존재,기상대분자질량약위14ku,병능위항His화항mIL-15항체소특이성식별.경Ni-NTA주상단백순화、포함체복성후,가득도순도약위95%적성숙단백.성숙mIL-15능구촉진CTLL-2세포증식,병구유명현적량효관계;병차,재mIL-15Rα적배합하,mIL-15적촉CTLL-2세포증식적활성현저증강,우기시재저mIL-15농도조건하해협동작용표현득유발명현.결론 획득료구유생물활성중조mIL-15,병초보연구료기여mIL-15Rα조성복합물적체외협동효응.해연구성과위진일보연구IL-15 급IL-15Rα협동성적작용궤리화개전소서성체면역치료연구전정료기출.
