福建农林大学学报（自然科学版）
福建農林大學學報（自然科學版）
복건농림대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURE AND FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2011年
2期
165-171
,共7页
郭菁%田宝玉%蔡婉玲%黄薇%江贤章%黄建忠
郭菁%田寶玉%蔡婉玲%黃薇%江賢章%黃建忠
곽정%전보옥%채완령%황미%강현장%황건충
侧孢短芽孢杆菌%侵染性蛋白酶%枯草芽孢杆菌%高效表达%酶学特性%线虫
側孢短芽孢桿菌%侵染性蛋白酶%枯草芽孢桿菌%高效錶達%酶學特性%線蟲
측포단아포간균%침염성단백매%고초아포간균%고효표체%매학특성%선충
侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB6000中,转化子pWT22-BIG4/WB600在IPTG(1.0 mmol·L-1)的诱导下,发酵液上清中的蛋白酶活可达到620U·mL-1,高于出发菌株G4的BLG4酶活(240 U·mL-1).经SDS-PAGE分析,重组子pWT22-BLG4/WB600产生了一条分子质量约为30ku的条带,该条带的大小与侧孢短芽孢杆菌G4上清发酵液中BLG4条带的大小一致.而未经IPTG诱导的重组子pWT22-BLG4和经IPTG诱导的WB600则未出现该条带.结果证明侧孢短芽孢杆菌G4的碱性蛋白酶基因BLG4已在枯草芽孢杆菌WB600中获得了成功表达.重组蛋白酶具有与侧孢短芽孢杆菌G4产生的BLG4蛋白酶同样的酶学性质.同时,重组蛋白酶具有明显的杀线虫和体壁降解能力,表明其在线虫生物防治中将有广泛的应用前景.
側孢短芽孢桿菌G4菌株在侵染線蟲的過程中可以分泌蛋白酶,降解線蟲體壁,從而幫助細菌侵入宿主體內.在本文中,側孢短芽孢桿菌的胞外蛋白酶BLG4基因經剋隆後插入到改造後的枯草芽孢桿菌錶達載體pWT22中,構建重組錶達質粒pWT22-BLG4.構建成功的重組質粒通過化學轉化法轉入枯草芽孢桿菌蛋白酶缺失菌株WB6000中,轉化子pWT22-BIG4/WB600在IPTG(1.0 mmol·L-1)的誘導下,髮酵液上清中的蛋白酶活可達到620U·mL-1,高于齣髮菌株G4的BLG4酶活(240 U·mL-1).經SDS-PAGE分析,重組子pWT22-BLG4/WB600產生瞭一條分子質量約為30ku的條帶,該條帶的大小與側孢短芽孢桿菌G4上清髮酵液中BLG4條帶的大小一緻.而未經IPTG誘導的重組子pWT22-BLG4和經IPTG誘導的WB600則未齣現該條帶.結果證明側孢短芽孢桿菌G4的堿性蛋白酶基因BLG4已在枯草芽孢桿菌WB600中穫得瞭成功錶達.重組蛋白酶具有與側孢短芽孢桿菌G4產生的BLG4蛋白酶同樣的酶學性質.同時,重組蛋白酶具有明顯的殺線蟲和體壁降解能力,錶明其在線蟲生物防治中將有廣汎的應用前景.
측포단아포간균G4균주재침염선충적과정중가이분비단백매,강해선충체벽,종이방조세균침입숙주체내.재본문중,측포단아포간균적포외단백매BLG4기인경극륭후삽입도개조후적고초아포간균표체재체pWT22중,구건중조표체질립pWT22-BLG4.구건성공적중조질립통과화학전화법전입고초아포간균단백매결실균주WB6000중,전화자pWT22-BIG4/WB600재IPTG(1.0 mmol·L-1)적유도하,발효액상청중적단백매활가체도620U·mL-1,고우출발균주G4적BLG4매활(240 U·mL-1).경SDS-PAGE분석,중조자pWT22-BLG4/WB600산생료일조분자질량약위30ku적조대,해조대적대소여측포단아포간균G4상청발효액중BLG4조대적대소일치.이미경IPTG유도적중조자pWT22-BLG4화경IPTG유도적WB600칙미출현해조대.결과증명측포단아포간균G4적감성단백매기인BLG4이재고초아포간균WB600중획득료성공표체.중조단백매구유여측포단아포간균G4산생적BLG4단백매동양적매학성질.동시,중조단백매구유명현적살선충화체벽강해능력,표명기재선충생물방치중장유엄범적응용전경.
