生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
3期
291-293
,共3页
ecp%克隆%表达%抗体制备%黑腹果蝇
ecp%剋隆%錶達%抗體製備%黑腹果蠅
ecp%극륭%표체%항체제비%흑복과승
获得特异性抗Ecp多克隆抗体,为进一步研究ecp的功能奠定基础.利用特异引物,通过RT-PCR扩增出编码Ecp蛋白的全长cDNA,克隆至谷胱甘肽S转移酶融合蛋白表达载体pGEX-4T-1(His)6C中,转染大肠杆菌DH 5α,经诱导表达后,利用谷胱甘肽琼脂糖珠从细胞裂解物中特异吸附融合蛋白,经凝血酶裂解,释放出Ecp蛋白,再经Ni-NTA亲和层析,最终获得高纯度的Ecp蛋白.用纯化的Ecp蛋白免疫新西兰家兔,亲和层析纯化抗Ecp抗体.利用该抗体进行的Western Blot结果表明:Ecp蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎、三龄幼虫神经系统、成虫、成虫头部组织中均有明显表达,提示ecp可能是一个重要的管家基因.
穫得特異性抗Ecp多剋隆抗體,為進一步研究ecp的功能奠定基礎.利用特異引物,通過RT-PCR擴增齣編碼Ecp蛋白的全長cDNA,剋隆至穀胱甘肽S轉移酶融閤蛋白錶達載體pGEX-4T-1(His)6C中,轉染大腸桿菌DH 5α,經誘導錶達後,利用穀胱甘肽瓊脂糖珠從細胞裂解物中特異吸附融閤蛋白,經凝血酶裂解,釋放齣Ecp蛋白,再經Ni-NTA親和層析,最終穫得高純度的Ecp蛋白.用純化的Ecp蛋白免疫新西蘭傢兔,親和層析純化抗Ecp抗體.利用該抗體進行的Western Blot結果錶明:Ecp蛋白在野生型黑腹果蠅胚胎、三齡幼蟲神經繫統、成蟲、成蟲頭部組織中均有明顯錶達,提示ecp可能是一箇重要的管傢基因.
획득특이성항Ecp다극륭항체,위진일보연구ecp적공능전정기출.이용특이인물,통과RT-PCR확증출편마Ecp단백적전장cDNA,극륭지곡광감태S전이매융합단백표체재체pGEX-4T-1(His)6C중,전염대장간균DH 5α,경유도표체후,이용곡광감태경지당주종세포렬해물중특이흡부융합단백,경응혈매렬해,석방출Ecp단백,재경Ni-NTA친화층석,최종획득고순도적Ecp단백.용순화적Ecp단백면역신서란가토,친화층석순화항Ecp항체.이용해항체진행적Western Blot결과표명:Ecp단백재야생형흑복과승배태、삼령유충신경계통、성충、성충두부조직중균유명현표체,제시ecp가능시일개중요적관가기인.
