中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2004年
2期
117-121
,共5页
何东苟%余新炳%吴忠道%徐劲%吴德%胡旭初%陈守义
何東茍%餘新炳%吳忠道%徐勁%吳德%鬍旭初%陳守義
하동구%여신병%오충도%서경%오덕%호욱초%진수의
华支睾吸虫%翻译控制肿瘤蛋白%克隆
華支睪吸蟲%翻譯控製腫瘤蛋白%剋隆
화지고흡충%번역공제종류단백%극륭
目的通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3上,为进一步研究其功能奠定基础.方法将插入于pBluescript质粒上的cDNA进行随机测序,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifsan、Scanprosite等程序对其进行结构域分析.根据PGEX-4T-1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的csTCTPcDNA编码序列设计引物,进行PCR扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX4T-1和真核表达载体pcDNA3上.构建的PGEX4T-1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实.结果发现华支睾吸虫新基因--csTCTP,完整阅读框含510个碱基,编码169个氨基酸,理论分子量为19.4596 Kd.序列分析表明,csTCTP编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,Motifscan及Scanprosite程序发现推导的氨基酸序列具有TCTP保守的完整功能域以及两个典型的TCTP完整标签.所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符.结论发现华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因,并成功构建原核和真核重组表达质粒.
目的通過cDNA文庫篩選識彆華支睪吸蟲新基因,併將所髮現的華支睪吸蟲翻譯控製腫瘤蛋白(csTCTP)編碼區剋隆到原覈錶達質粒PGEX-4T-1和真覈錶達質粒pcDNA3上,為進一步研究其功能奠定基礎.方法將插入于pBluescript質粒上的cDNA進行隨機測序,在NCBI和ExPasy網站上進行序列分析,識彆華支睪吸蟲新基因,併應用Motifsan、Scanprosite等程序對其進行結構域分析.根據PGEX-4T-1和pcDNA3上的剋隆位點及所髮現的csTCTPcDNA編碼序列設計引物,進行PCR擴增,擴增產物迴收純化後剋隆到原覈錶達載體PGEX4T-1和真覈錶達載體pcDNA3上.構建的PGEX4T-1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重組錶達質粒經PCR、雙酶切及測序證實.結果髮現華支睪吸蟲新基因--csTCTP,完整閱讀框含510箇堿基,編碼169箇氨基痠,理論分子量為19.4596 Kd.序列分析錶明,csTCTP編碼氨基痠序列與其它物種有較高的同源性,Motifscan及Scanprosite程序髮現推導的氨基痠序列具有TCTP保守的完整功能域以及兩箇典型的TCTP完整標籤.所構建的重組原覈和真覈錶達質粒經PCR、雙酶切及測序證實與目標基因相符.結論髮現華支睪吸蟲翻譯控製腫瘤蛋白基因,併成功構建原覈和真覈重組錶達質粒.
목적통과cDNA문고사선식별화지고흡충신기인,병장소발현적화지고흡충번역공제종류단백(csTCTP)편마구극륭도원핵표체질립PGEX-4T-1화진핵표체질립pcDNA3상,위진일보연구기공능전정기출.방법장삽입우pBluescript질립상적cDNA진행수궤측서,재NCBI화ExPasy망참상진행서렬분석,식별화지고흡충신기인,병응용Motifsan、Scanprosite등정서대기진행결구역분석.근거PGEX-4T-1화pcDNA3상적극륭위점급소발현적csTCTPcDNA편마서렬설계인물,진행PCR확증,확증산물회수순화후극륭도원핵표체재체PGEX4T-1화진핵표체재체pcDNA3상.구건적PGEX4T-1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP중조표체질립경PCR、쌍매절급측서증실.결과발현화지고흡충신기인--csTCTP,완정열독광함510개감기,편마169개안기산,이론분자량위19.4596 Kd.서렬분석표명,csTCTP편마안기산서렬여기타물충유교고적동원성,Motifscan급Scanprosite정서발현추도적안기산서렬구유TCTP보수적완정공능역이급량개전형적TCTP완정표첨.소구건적중조원핵화진핵표체질립경PCR、쌍매절급측서증실여목표기인상부.결론발현화지고흡충번역공제종류단백기인,병성공구건원핵화진핵중조표체질립.
