遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2005年
6期
579-585
,共7页
赵军胜%支大英%薛哲勇%夏光敏
趙軍勝%支大英%薛哲勇%夏光敏
조군성%지대영%설철용%하광민
高羊茅%AtNHX1基因%根癌农杆菌%转基因植株
高羊茅%AtNHX1基因%根癌農桿菌%轉基因植株
고양모%AtNHX1기인%근암농간균%전기인식주
采用携带卡那霉素抗性基因nptⅡ和Na+/H+反向运输AtNHX1基因的表达载体pROK2/AtNHX1(带有35S启动子)和pROK2U/AtNHX1(带有ubi1启动子)的根癌农杆菌 AGL1 和GV3101,对4个品种高羊茅下胚轴来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化.胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50～150 mg/L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,获得1 126棵再生植株,用10～20 mg/L卡那霉素进一步筛选再生植株,总共得到525棵绿色抗性植株.抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测,其中21棵为PCR阳性,最高转化频率为1.77%.Southern杂交结果证实,外源基因以低拷贝整合到高羊茅的基因组中,实验发现,在不同品种之间转化效率有所差异.
採用攜帶卡那黴素抗性基因nptⅡ和Na+/H+反嚮運輸AtNHX1基因的錶達載體pROK2/AtNHX1(帶有35S啟動子)和pROK2U/AtNHX1(帶有ubi1啟動子)的根癌農桿菌 AGL1 和GV3101,對4箇品種高羊茅下胚軸來源的胚性愈傷組織進行瞭遺傳轉化.胚性愈傷組織經根癌農桿菌感染和共培養後,用50～150 mg/L巴龍黴素篩選抗性愈傷組織,穫得1 126棵再生植株,用10～20 mg/L卡那黴素進一步篩選再生植株,總共得到525棵綠色抗性植株.抗性植株的總DNA用AtNHX1基因的特異引物進行PCR檢測,其中21棵為PCR暘性,最高轉化頻率為1.77%.Southern雜交結果證實,外源基因以低拷貝整閤到高羊茅的基因組中,實驗髮現,在不同品種之間轉化效率有所差異.
채용휴대잡나매소항성기인nptⅡ화Na+/H+반향운수AtNHX1기인적표체재체pROK2/AtNHX1(대유35S계동자)화pROK2U/AtNHX1(대유ubi1계동자)적근암농간균 AGL1 화GV3101,대4개품충고양모하배축래원적배성유상조직진행료유전전화.배성유상조직경근암농간균감염화공배양후,용50～150 mg/L파룡매소사선항성유상조직,획득1 126과재생식주,용10～20 mg/L잡나매소진일보사선재생식주,총공득도525과록색항성식주.항성식주적총DNA용AtNHX1기인적특이인물진행PCR검측,기중21과위PCR양성,최고전화빈솔위1.77%.Southern잡교결과증실,외원기인이저고패정합도고양모적기인조중,실험발현,재불동품충지간전화효솔유소차이.
