中国矫形外科杂志
中國矯形外科雜誌
중국교형외과잡지
THE ORTHOPEDIC JOURNAL OF CHINA
2007年
16期
1253-1256
,共4页
滕勇%胡蕴玉%王捍国%宿学家%王臻%关玉成%高杰
滕勇%鬍蘊玉%王捍國%宿學傢%王臻%關玉成%高傑
등용%호온옥%왕한국%숙학가%왕진%관옥성%고걸
人端粒酶逆转录酶%端粒酶%人骨髓间充质干细胞%基因
人耑粒酶逆轉錄酶%耑粒酶%人骨髓間充質榦細胞%基因
인단립매역전록매%단립매%인골수간충질간세포%기인
[目的]明确外源性人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)能否激活人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchyme stem cell,hBMSC)的端粒酶活性.[方法]培养人骨髓间充质干细胞,采用脂质体转染法,将编码hTERT基因的真核表达质粒pCIneo-hTERT导入单克隆培养的人骨髓间充质干细胞.利用G418加压筛选,稳定后,用RT-PCR检测hTERT mRNA的表达,Western Blot检测其蛋白质表达,专用检测盒RT-PCR法检测端粒酶的活性.[结果]骨髓间充质干细胞转染质粒pCIneo-hTERT后,生长状态良好.加G418后第2 d,细胞开始悬浮,逐渐死亡.第10 d,未转染组细胞在G418作用下全部死亡,转染组细胞开始克隆增殖.G418浓度降至100 μg/ml维持筛选,20 d左右开始出现明显抗G418细胞克隆.转染后细胞,表达hTERT的mRNA及其蛋白,同时端粒酶活性显著增高.[结论]将外源性hTERT导入人骨髓间充质干细胞可以激活细胞的端粒酶活性,为建立永生化细胞系奠定了基础.
[目的]明確外源性人耑粒酶逆轉錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)能否激活人骨髓間充質榦細胞(human bone marrow mesenchyme stem cell,hBMSC)的耑粒酶活性.[方法]培養人骨髓間充質榦細胞,採用脂質體轉染法,將編碼hTERT基因的真覈錶達質粒pCIneo-hTERT導入單剋隆培養的人骨髓間充質榦細胞.利用G418加壓篩選,穩定後,用RT-PCR檢測hTERT mRNA的錶達,Western Blot檢測其蛋白質錶達,專用檢測盒RT-PCR法檢測耑粒酶的活性.[結果]骨髓間充質榦細胞轉染質粒pCIneo-hTERT後,生長狀態良好.加G418後第2 d,細胞開始懸浮,逐漸死亡.第10 d,未轉染組細胞在G418作用下全部死亡,轉染組細胞開始剋隆增殖.G418濃度降至100 μg/ml維持篩選,20 d左右開始齣現明顯抗G418細胞剋隆.轉染後細胞,錶達hTERT的mRNA及其蛋白,同時耑粒酶活性顯著增高.[結論]將外源性hTERT導入人骨髓間充質榦細胞可以激活細胞的耑粒酶活性,為建立永生化細胞繫奠定瞭基礎.
[목적]명학외원성인단립매역전록매(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)능부격활인골수간충질간세포(human bone marrow mesenchyme stem cell,hBMSC)적단립매활성.[방법]배양인골수간충질간세포,채용지질체전염법,장편마hTERT기인적진핵표체질립pCIneo-hTERT도입단극륭배양적인골수간충질간세포.이용G418가압사선,은정후,용RT-PCR검측hTERT mRNA적표체,Western Blot검측기단백질표체,전용검측합RT-PCR법검측단립매적활성.[결과]골수간충질간세포전염질립pCIneo-hTERT후,생장상태량호.가G418후제2 d,세포개시현부,축점사망.제10 d,미전염조세포재G418작용하전부사망,전염조세포개시극륭증식.G418농도강지100 μg/ml유지사선,20 d좌우개시출현명현항G418세포극륭.전염후세포,표체hTERT적mRNA급기단백,동시단립매활성현저증고.[결론]장외원성hTERT도입인골수간충질간세포가이격활세포적단립매활성,위건립영생화세포계전정료기출.
