分析科学学报
分析科學學報
분석과학학보
JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE
2009年
1期
67-70
,共4页
周世力%朱绍咏%许国权%王国梁%韩雪
週世力%硃紹詠%許國權%王國樑%韓雪
주세력%주소영%허국권%왕국량%한설
肠道病毒71型%VP2%巴斯德毕赤酵母%GS115菌株
腸道病毒71型%VP2%巴斯德畢赤酵母%GS115菌株
장도병독71형%VP2%파사덕필적효모%GS115균주
利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)SHZH03株外壳蛋白VP2基因,构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K/VP2,经序列测定证实α-factor信号肽和VP2的序列和阅读框正确后,用SacI酶切使之线性化,电转化法将目的基因整合到宿主菌GS115基因组上;经转化子表型筛选和PCR分析鉴定后,甲醇诱导筛选到高效表达VP2蛋白的工程菌株.用饱和硫酸铵法对重组蛋白VP2进行了较好的纯化.Western Blot分析表明,重组蛋白VP2具有较好的反应原性,从而为发展EV71快速、高效、廉价诊断试剂奠定了基础.
利用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)的方法,剋隆腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)SHZH03株外殼蛋白VP2基因,構建酵母分泌型錶達質粒pPIC9K/VP2,經序列測定證實α-factor信號肽和VP2的序列和閱讀框正確後,用SacI酶切使之線性化,電轉化法將目的基因整閤到宿主菌GS115基因組上;經轉化子錶型篩選和PCR分析鑒定後,甲醇誘導篩選到高效錶達VP2蛋白的工程菌株.用飽和硫痠銨法對重組蛋白VP2進行瞭較好的純化.Western Blot分析錶明,重組蛋白VP2具有較好的反應原性,從而為髮展EV71快速、高效、廉價診斷試劑奠定瞭基礎.
이용역전록취합매련식반응(RT-PCR)적방법,극륭장도병독71형(Enterovirus 71,EV71)SHZH03주외각단백VP2기인,구건효모분비형표체질립pPIC9K/VP2,경서렬측정증실α-factor신호태화VP2적서렬화열독광정학후,용SacI매절사지선성화,전전화법장목적기인정합도숙주균GS115기인조상;경전화자표형사선화PCR분석감정후,갑순유도사선도고효표체VP2단백적공정균주.용포화류산안법대중조단백VP2진행료교호적순화.Western Blot분석표명,중조단백VP2구유교호적반응원성,종이위발전EV71쾌속、고효、렴개진단시제전정료기출.
