CAJ | 학술논문

抗人Kv1.5胞外环肽段E215抗体的制备与鉴定
항인Kv1.5포외배태단E215항체적제비여감정
Preparation and verification of antibodies against the peptide fragment E215 from the extracellular loop of human Kv1.5

万方数据

临床心血管病杂志臨床心血管病雜誌 림상심혈관병잡지
JOURNAL OF CLINICAL CARDIOLOGY
2010年 5期 389-392 ,共4页

戴芝银%刘坤%曾秋棠%刘金平%祝聪聪%杨晓芳%廖玉华%王敏%陈志坚%黄丹%刘鸿涛

대지은%류곤%증추당%류금평%축총총%양효방%료옥화%왕민%진지견%황단%류홍도

抗体%人心房肌细胞%Kv1.5%胞外环抗體%人心房肌細胞%Kv1.5%胞外環
항체%인심방기세포%Kv1.5%포외배

目的:为研究新的人Kv1.5(hKv1.5)通道/超快激活延迟整流钾通道(Ikur)阻滞剂,通过免疫法制备抗hKv1.5胞外环肽段E215的特异性抗体,并进行鉴定.方法:雄性新西兰大白兔,随机分为免疫组和假性免疫组.从hKv1.5胞外环中筛选出一段短肽E215作为抗原肽免疫动物.免疫组予抗原免疫,2周1次,假性免疫组予0.9%氯化钠溶液免疫,方法同前.实验63 d处死,留取血清,亲合层析法提取、纯化抗肽段E215抗体.酶联免疫吸附法(ELISA)动态地观察抗体在体内的产生及效价,免疫荧光组织化学及免疫印迹(Western-blot)观察制备的抗体与人心房肌细胞膜及hKv1.5/Ikur通道蛋白的结合.结果:ELISA结果表明,免疫组于实验第28、42、56、63 d血清抗体滴度分别达到1:6 400、1:6 400、1:6 400、1:12 800;免疫荧光组织化学显示,制备的抗体能结合于人心房肌细胞的细胞膜;Western-blot结果表明,此抗体能特异性结合人心房肌细胞膜上分子量为75 000的蛋白(hKv1.5/Ikur通道蛋白).而假性免疫组未发现相同抗体产生.结论:所制备胞外环肽段E215的抗体能与人心房肌细胞膜上hKv1.5/Ikur通道特异性结合,为下一步实验提供了新的药理学干预手段.
목적:위연구신적인Kv1.5(hKv1.5)통도/초쾌격활연지정류갑통도(Ikur)조체제,통과면역법제비항hKv1.5포외배태단E215적특이성항체,병진행감정.방법:웅성신서란대백토,수궤분위면역조화가성면역조.종hKv1.5포외배중사선출일단단태E215작위항원태면역동물.면역조여항원면역,2주1차,가성면역조여0.9%록화납용액면역,방법동전.실험63 d처사,류취혈청,친합층석법제취、순화항태단E215항체.매련면역흡부법(ELISA)동태지관찰항체재체내적산생급효개,면역형광조직화학급면역인적(Western-blot)관찰제비적항체여인심방기세포막급hKv1.5/Ikur통도단백적결합.결과:ELISA결과표명,면역조우실험제28、42、56、63 d혈청항체적도분별체도1:6 400、1:6 400、1:6 400、1:12 800;면역형광조직화학현시,제비적항체능결합우인심방기세포적세포막;Western-blot결과표명,차항체능특이성결합인심방기세포막상분자량위75 000적단백(hKv1.5/Ikur통도단백).이가성면역조미발현상동항체산생.결론:소제비포외배태단E215적항체능여인심방기세포막상hKv1.5/Ikur통도특이성결합,위하일보실험제공료신적약이학간예수단.