汕头大学医学院学报
汕頭大學醫學院學報
산두대학의학원학보
JOURNAL OF SHANTOU UNIVERSITY MEDICAL COLLEGE
2010年
3期
134-137,封4
,共5页
吴健谊%蒋太峰%许丽艳%李恩民%谢剑君
吳健誼%蔣太峰%許麗豔%李恩民%謝劍君
오건의%장태봉%허려염%리은민%사검군
CDK3%基因克隆%真核表达载体
CDK3%基因剋隆%真覈錶達載體
CDK3%기인극륭%진핵표체재체
目的:构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶3(CDK3)在哺乳动物细胞的表达载体,并在真核细胞NIH3T3中进行初步表达.方法:从食管癌细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CDK3编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK3片段分别亚克隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;将获得的表达载体转染小鼠成纤维细胞NIH3T3,并用蛋白免疫印迹法进行初步的CDK3表达分析.结果:PCR扩增获得约900 bp目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析显示重组片段是人CDK3基因序列,全长915 bp;CDK3目的片段分别亚克隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP载体,获得相应表达载体;运用构建的表达载体,可以在真核细胞中表达出CDK3蛋白.结论:成功构建了CDK3系列哺乳动物细胞表达载体,并在NIH3T3中得到表达.
目的:構建一繫列細胞週期蛋白依賴激酶3(CDK3)在哺乳動物細胞的錶達載體,併在真覈細胞NIH3T3中進行初步錶達.方法:從食管癌細胞中提取總RNA,RT-PCR擴增CDK3編碼區,然後將PCR產物剋隆到T載體;擴增後的CDK3片段分彆亞剋隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP等4種哺乳動物錶達載體;將穫得的錶達載體轉染小鼠成纖維細胞NIH3T3,併用蛋白免疫印跡法進行初步的CDK3錶達分析.結果:PCR擴增穫得約900 bp目的片段,經T載體剋隆和DNA序列分析顯示重組片段是人CDK3基因序列,全長915 bp;CDK3目的片段分彆亞剋隆入pcDNA3-4、pNTAP和pEGFP載體,穫得相應錶達載體;運用構建的錶達載體,可以在真覈細胞中錶達齣CDK3蛋白.結論:成功構建瞭CDK3繫列哺乳動物細胞錶達載體,併在NIH3T3中得到錶達.
목적:구건일계렬세포주기단백의뢰격매3(CDK3)재포유동물세포적표체재체,병재진핵세포NIH3T3중진행초보표체.방법:종식관암세포중제취총RNA,RT-PCR확증CDK3편마구,연후장PCR산물극륭도T재체;확증후적CDK3편단분별아극륭입pcDNA3-4、pNTAP화pEGFP등4충포유동물표체재체;장획득적표체재체전염소서성섬유세포NIH3T3,병용단백면역인적법진행초보적CDK3표체분석.결과:PCR확증획득약900 bp목적편단,경T재체극륭화DNA서렬분석현시중조편단시인CDK3기인서렬,전장915 bp;CDK3목적편단분별아극륭입pcDNA3-4、pNTAP화pEGFP재체,획득상응표체재체;운용구건적표체재체,가이재진핵세포중표체출CDK3단백.결론:성공구건료CDK3계렬포유동물세포표체재체,병재NIH3T3중득도표체.
