实用检验医师杂志
實用檢驗醫師雜誌
실용검험의사잡지
Chinese Journal of Laboratory Pathologist
2010年
3期
137-142
,共6页
焦磷酸测序%耐药突变%乙型肝炎病毒%突变
焦燐痠測序%耐藥突變%乙型肝炎病毒%突變
초린산측서%내약돌변%을형간염병독%돌변
目的 建立准确、快速、灵敏、高通量的检测常见乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)耐药位点突变的临床检测方法.方法 设计针对聚合酶YMDD区及其附近常见耐药突变区域和基本核心启动子区(basic core promoter, BCP)1762、1764双突变区域的扩增引物,经PCR扩增及磁珠分离,制备焦磷酸测序单链模板,并在PyroMark ID遗传分析系统上进行焦磷酸测序,批量检定300例临床血清标本,与目前常用的YMDD试剂盒和Sanger测序法测序结果进行比较.结果将PCR扩增得到HBV P区和BCP区产物经琼脂糖凝胶电泳显示:HBV定量结果阳性(拷贝数≥10<'3>)的标本均能得到清晰地PCR产物条带.焦磷酸测序进行突变频率检测具有极高的准确性,且能够进行低频率(<5%)的突变检测.焦磷酸测序法和Sanger测序法检测突变位点得到的结果一致,匹配率达100%,而YMDD荧光定量检测法检测突变位点与上述两法匹配率仅为75%.结果 本文成功建立了基于焦磷酸测序技术的HBV常见耐药突变检测平台,实现了临床血清标本的高通量检测.该方法具有较好的灵敏度、特异性和准确性,且能进行低频率(<5%)突变检测.该测序系统比Sanger测序具有更高的通量、更准确的结果及快速简便的操作,是一种适用临床常见HBV耐药突变位点分析的检测技术,易于在临床推广应用.
目的 建立準確、快速、靈敏、高通量的檢測常見乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)耐藥位點突變的臨床檢測方法.方法 設計針對聚閤酶YMDD區及其附近常見耐藥突變區域和基本覈心啟動子區(basic core promoter, BCP)1762、1764雙突變區域的擴增引物,經PCR擴增及磁珠分離,製備焦燐痠測序單鏈模闆,併在PyroMark ID遺傳分析繫統上進行焦燐痠測序,批量檢定300例臨床血清標本,與目前常用的YMDD試劑盒和Sanger測序法測序結果進行比較.結果將PCR擴增得到HBV P區和BCP區產物經瓊脂糖凝膠電泳顯示:HBV定量結果暘性(拷貝數≥10<'3>)的標本均能得到清晰地PCR產物條帶.焦燐痠測序進行突變頻率檢測具有極高的準確性,且能夠進行低頻率(<5%)的突變檢測.焦燐痠測序法和Sanger測序法檢測突變位點得到的結果一緻,匹配率達100%,而YMDD熒光定量檢測法檢測突變位點與上述兩法匹配率僅為75%.結果 本文成功建立瞭基于焦燐痠測序技術的HBV常見耐藥突變檢測平檯,實現瞭臨床血清標本的高通量檢測.該方法具有較好的靈敏度、特異性和準確性,且能進行低頻率(<5%)突變檢測.該測序繫統比Sanger測序具有更高的通量、更準確的結果及快速簡便的操作,是一種適用臨床常見HBV耐藥突變位點分析的檢測技術,易于在臨床推廣應用.
목적 건립준학、쾌속、령민、고통량적검측상견을형간염병독(Hepatitis B virus,HBV)내약위점돌변적림상검측방법.방법 설계침대취합매YMDD구급기부근상견내약돌변구역화기본핵심계동자구(basic core promoter, BCP)1762、1764쌍돌변구역적확증인물,경PCR확증급자주분리,제비초린산측서단련모판,병재PyroMark ID유전분석계통상진행초린산측서,비량검정300례림상혈청표본,여목전상용적YMDD시제합화Sanger측서법측서결과진행비교.결과장PCR확증득도HBV P구화BCP구산물경경지당응효전영현시:HBV정량결과양성(고패수≥10<'3>)적표본균능득도청석지PCR산물조대.초린산측서진행돌변빈솔검측구유겁고적준학성,차능구진행저빈솔(<5%)적돌변검측.초린산측서법화Sanger측서법검측돌변위점득도적결과일치,필배솔체100%,이YMDD형광정량검측법검측돌변위점여상술량법필배솔부위75%.결과 본문성공건립료기우초린산측서기술적HBV상견내약돌변검측평태,실현료림상혈청표본적고통량검측.해방법구유교호적령민도、특이성화준학성,차능진행저빈솔(<5%)돌변검측.해측서계통비Sanger측서구유경고적통량、경준학적결과급쾌속간편적조작,시일충괄용림상상견HBV내약돌변위점분석적검측기술,역우재림상추엄응용.
