生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
10期
145-150
,共6页
庆格乐图%杨薇薇%晏鹏飞%苏幼红%李江伟
慶格樂圖%楊薇薇%晏鵬飛%囌幼紅%李江偉
경격악도%양미미%안붕비%소유홍%리강위
丹毒丝菌%SpaA-N%表位预测%HPV-16 L1%嵌合质粒%瞬时表达%杀菌活性
丹毒絲菌%SpaA-N%錶位預測%HPV-16 L1%嵌閤質粒%瞬時錶達%殺菌活性
단독사균%SpaA-N%표위예측%HPV-16 L1%감합질립%순시표체%살균활성
为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白( HPV-16 LI) HI环结构的编码序列中,构建获得重组嵌合质粒pcDNA3-HPV-LI -△spaA.该重组质粒经体内、外瞬时特染后,RT-PCR均扩增获得了1 500 bp左右的目的片段.免疫印迹试验显示,体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与GST-SpaA-N重组蛋白免疫血清在56 kD处产生特异性结合.ELISA分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体(P＜0.01),抗体滴度为1:1 000.此外,pcDNA3-HPV-L1-△spaA制备的抗血清至少可在1∶10稀释度条件下,介导外源补体对半数以上的菌体进行杀伤.该研究表明,获得的SpaA-N表位DNA嵌合疫苗具有免疫活性,为研发安全有效的丹毒丝菌新型DNA疫苗提供了一个新思路.
為確定丹毒絲菌錶麵保護性抗原A的N-末耑(SpaA-N)優勢抗原錶位,研髮新型錶位DNA嵌閤疫苗,利用生物信息學軟件對丹毒絲菌SpaA-N的優勢B細胞抗原錶位進行預測,以重疊PCR將優勢錶位插入人乳頭瘤病毒16型的主要衣殼蛋白( HPV-16 LI) HI環結構的編碼序列中,構建穫得重組嵌閤質粒pcDNA3-HPV-LI -△spaA.該重組質粒經體內、外瞬時特染後,RT-PCR均擴增穫得瞭1 500 bp左右的目的片段.免疫印跡試驗顯示,體外轉染嵌閤質粒的細胞總蛋白能夠與GST-SpaA-N重組蛋白免疫血清在56 kD處產生特異性結閤.ELISA分析顯示嵌閤質粒可在小鼠體內產生差異顯著的特異性抗體(P＜0.01),抗體滴度為1:1 000.此外,pcDNA3-HPV-L1-△spaA製備的抗血清至少可在1∶10稀釋度條件下,介導外源補體對半數以上的菌體進行殺傷.該研究錶明,穫得的SpaA-N錶位DNA嵌閤疫苗具有免疫活性,為研髮安全有效的丹毒絲菌新型DNA疫苗提供瞭一箇新思路.
위학정단독사균표면보호성항원A적N-말단(SpaA-N)우세항원표위,연발신형표위DNA감합역묘,이용생물신식학연건대단독사균SpaA-N적우세B세포항원표위진행예측,이중첩PCR장우세표위삽입인유두류병독16형적주요의각단백( HPV-16 LI) HI배결구적편마서렬중,구건획득중조감합질립pcDNA3-HPV-LI -△spaA.해중조질립경체내、외순시특염후,RT-PCR균확증획득료1 500 bp좌우적목적편단.면역인적시험현시,체외전염감합질립적세포총단백능구여GST-SpaA-N중조단백면역혈청재56 kD처산생특이성결합.ELISA분석현시감합질립가재소서체내산생차이현저적특이성항체(P＜0.01),항체적도위1:1 000.차외,pcDNA3-HPV-L1-△spaA제비적항혈청지소가재1∶10희석도조건하,개도외원보체대반수이상적균체진행살상.해연구표명,획득적SpaA-N표위DNA감합역묘구유면역활성,위연발안전유효적단독사균신형DNA역묘제공료일개신사로.
