实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2012年
18期
1397-1401
,共5页
自噬%凋亡%PC12%氧糖剥夺%再灌注
自噬%凋亡%PC12%氧糖剝奪%再灌註
자서%조망%PC12%양당박탈%재관주
目的 观察氧糖剥夺/再灌注(OGD/OGD-R)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞自噬和凋亡的发生及进展.方法 PC12细胞经氧糖剥夺及再灌注处理建立OGD/OGD-R模型,在处理不同时间点,应用流式细胞仪检测OGD组及OGD-R组细胞活性和凋亡率；Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达；免疫荧光法观察自噬小体；分别使用自噬上下游抑制剂(3-甲基腺嘌呤、E64 d+pepstatin A)进行调控,观察自噬的波动.结果 随着氧糖剥夺时间的延长,OGD组细胞形态损伤逐步加重,凋亡率显著增高,呈时间依赖性；OGD-R组早期细胞活性略有恢复,随着再灌注时程的延长,细胞凋亡率逐渐增高.自噬相关蛋白LC3Ⅱ在OGD短暂处理后其表达即有上升,3h左右达到峰值,6～8h恢复到基础水平；Beclin 1蛋白呈先上升后平稳下降趋势.OGD 3h时间点诱导自噬合并3-甲基腺嘌呤处理后自噬体减少明显；而E64d+pepstatin A可导致LC3Ⅱ的积聚.OGD-R阶段LC3Ⅱ进一步升高至再灌注12 h后开始下降,Beclin 1蛋白表达呈升高趋势并持续至再灌注24h.结论 OGD/OGD-R均能激活PC12细胞自噬与凋亡,可为探索自噬与凋亡间潜在的串流奠定基础.
目的 觀察氧糖剝奪/再灌註(OGD/OGD-R)誘導大鼠嗜鉻細胞瘤細胞PC12細胞自噬和凋亡的髮生及進展.方法 PC12細胞經氧糖剝奪及再灌註處理建立OGD/OGD-R模型,在處理不同時間點,應用流式細胞儀檢測OGD組及OGD-R組細胞活性和凋亡率；Western blot法檢測自噬相關蛋白LC3、Beclin 1錶達；免疫熒光法觀察自噬小體；分彆使用自噬上下遊抑製劑(3-甲基腺嘌呤、E64 d+pepstatin A)進行調控,觀察自噬的波動.結果 隨著氧糖剝奪時間的延長,OGD組細胞形態損傷逐步加重,凋亡率顯著增高,呈時間依賴性；OGD-R組早期細胞活性略有恢複,隨著再灌註時程的延長,細胞凋亡率逐漸增高.自噬相關蛋白LC3Ⅱ在OGD短暫處理後其錶達即有上升,3h左右達到峰值,6～8h恢複到基礎水平；Beclin 1蛋白呈先上升後平穩下降趨勢.OGD 3h時間點誘導自噬閤併3-甲基腺嘌呤處理後自噬體減少明顯；而E64d+pepstatin A可導緻LC3Ⅱ的積聚.OGD-R階段LC3Ⅱ進一步升高至再灌註12 h後開始下降,Beclin 1蛋白錶達呈升高趨勢併持續至再灌註24h.結論 OGD/OGD-R均能激活PC12細胞自噬與凋亡,可為探索自噬與凋亡間潛在的串流奠定基礎.
목적 관찰양당박탈/재관주(OGD/OGD-R)유도대서기락세포류세포PC12세포자서화조망적발생급진전.방법 PC12세포경양당박탈급재관주처리건립OGD/OGD-R모형,재처리불동시간점,응용류식세포의검측OGD조급OGD-R조세포활성화조망솔；Western blot법검측자서상관단백LC3、Beclin 1표체；면역형광법관찰자서소체；분별사용자서상하유억제제(3-갑기선표령、E64 d+pepstatin A)진행조공,관찰자서적파동.결과 수착양당박탈시간적연장,OGD조세포형태손상축보가중,조망솔현저증고,정시간의뢰성；OGD-R조조기세포활성략유회복,수착재관주시정적연장,세포조망솔축점증고.자서상관단백LC3Ⅱ재OGD단잠처리후기표체즉유상승,3h좌우체도봉치,6～8h회복도기출수평；Beclin 1단백정선상승후평은하강추세.OGD 3h시간점유도자서합병3-갑기선표령처리후자서체감소명현；이E64d+pepstatin A가도치LC3Ⅱ적적취.OGD-R계단LC3Ⅱ진일보승고지재관주12 h후개시하강,Beclin 1단백표체정승고추세병지속지재관주24h.결론 OGD/OGD-R균능격활PC12세포자서여조망,가위탐색자서여조망간잠재적천류전정기출.
