细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
5期
563-567
,共5页
杨永昌%赖春宁%王琰%沈倍奋%黎燕
楊永昌%賴春寧%王琰%瀋倍奮%黎燕
양영창%뢰춘저%왕염%침배강%려연
血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa%Fab抗体%原核表达
血小闆糖蛋白Ⅱb/Ⅲa%Fab抗體%原覈錶達
혈소판당단백Ⅱb/Ⅲa%Fab항체%원핵표체
目的: 研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体. 方法: 通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验, 选取鼠源抗血小板糖蛋白Iib/IIIa单克隆抗体(mAb P140).从分泌该mAb的杂交瘤细胞株(P140)中, 克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因, 构建原核表达重组质粒p3MH/P140к-Fd, 并在XLI-Blu菌株中进行表达.采用钴亲和层析法对P140 Fab抗体进行纯化, 用SDS-PAGE、 ELISA和Western blot等方法, 对P140 Fab抗体进行检测, 并通过血小板聚集抑制试验, 观察P140 Fab抗体的抗栓活性. 结果: SDS-PAGE和Western blot表明, 纯化的P140 Fab抗体的相对分子质量(Mr)约为47 000.ELISA的结果显示, P140 Fab抗体可与人血小板特异性结合.在体外ADP诱导的血小板聚集试验中, P140 Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性, IC50的平均值为16.85 mg/L.结论: 成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白Iib/IIIa的Fab抗体.
目的: 研製抗血小闆膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗體. 方法: 通過間接免疫熒光試驗和血小闆聚集抑製試驗, 選取鼠源抗血小闆糖蛋白Iib/IIIa單剋隆抗體(mAb P140).從分泌該mAb的雜交瘤細胞株(P140)中, 剋隆到抗體輕鏈基因和重鏈Fd段基因, 構建原覈錶達重組質粒p3MH/P140к-Fd, 併在XLI-Blu菌株中進行錶達.採用鈷親和層析法對P140 Fab抗體進行純化, 用SDS-PAGE、 ELISA和Western blot等方法, 對P140 Fab抗體進行檢測, 併通過血小闆聚集抑製試驗, 觀察P140 Fab抗體的抗栓活性. 結果: SDS-PAGE和Western blot錶明, 純化的P140 Fab抗體的相對分子質量(Mr)約為47 000.ELISA的結果顯示, P140 Fab抗體可與人血小闆特異性結閤.在體外ADP誘導的血小闆聚集試驗中, P140 Fab抗體對血小闆聚集的抑製作用成劑量依賴性, IC50的平均值為16.85 mg/L.結論: 成功地研製齣具有抗栓活性的抗血小闆膜糖蛋白Iib/IIIa的Fab抗體.
목적: 연제항혈소판막당단백Ⅱb/Ⅲa Fab항체. 방법: 통과간접면역형광시험화혈소판취집억제시험, 선취서원항혈소판당단백Iib/IIIa단극륭항체(mAb P140).종분비해mAb적잡교류세포주(P140)중, 극륭도항체경련기인화중련Fd단기인, 구건원핵표체중조질립p3MH/P140к-Fd, 병재XLI-Blu균주중진행표체.채용고친화층석법대P140 Fab항체진행순화, 용SDS-PAGE、 ELISA화Western blot등방법, 대P140 Fab항체진행검측, 병통과혈소판취집억제시험, 관찰P140 Fab항체적항전활성. 결과: SDS-PAGE화Western blot표명, 순화적P140 Fab항체적상대분자질량(Mr)약위47 000.ELISA적결과현시, P140 Fab항체가여인혈소판특이성결합.재체외ADP유도적혈소판취집시험중, P140 Fab항체대혈소판취집적억제작용성제량의뢰성, IC50적평균치위16.85 mg/L.결론: 성공지연제출구유항전활성적항혈소판막당단백Iib/IIIa적Fab항체.
