中国微侵袭神经外科杂志
中國微侵襲神經外科雜誌
중국미침습신경외과잡지
CHINESE JOURNAL OF MINIMALLY INVASIVE NEUROSURGERY
2005年
7期
313-316
,共4页
朴明学%王忠诚%蒙和%何乐%王申五%张亚卓
樸明學%王忠誠%矇和%何樂%王申五%張亞卓
박명학%왕충성%몽화%하악%왕신오%장아탁
间质干细胞%转导,遗传%端粒,末端转移酶%细胞分化%无限增殖化
間質榦細胞%轉導,遺傳%耑粒,末耑轉移酶%細胞分化%無限增殖化
간질간세포%전도,유전%단립,말단전이매%세포분화%무한증식화
目的建立永生化的人骨髓基质细胞(hMSC)系,以供神经外科临床和基础研究使用.方法原代培养人骨髓基质细胞,采用含有人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的逆转录病毒载体上清感染hMSC,经筛选得到阳性克隆,在体外进行连续培养.应用PCR、逆转录PCR(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测hTERT基因的整合及表达情况,并用10%β-巯基乙醇(β-ME)、反式维甲酸(RA)、Forskolin和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对转化后的hMSC-hTERT细胞进行诱导,使其向神经元样细胞分化.结果外源性hTERT基因在DNA、RNA和蛋白质水平均有表达,诱导后的hMSC-hTERT细胞表达神经元特异性标志物神经核蛋白(NeuN)和βⅢ微管蛋白(Tubulin-βⅢ).hMSC-hTERT细胞至今已传至82代.结论外源hTERT基因在hMSC细胞中稳定整合并表达,永生化的hMSC细胞系成功建立:在一定诱导条件下,永生化的hMSC细胞能够在体外分化成神经元样细胞.
目的建立永生化的人骨髓基質細胞(hMSC)繫,以供神經外科臨床和基礎研究使用.方法原代培養人骨髓基質細胞,採用含有人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)基因的逆轉錄病毒載體上清感染hMSC,經篩選得到暘性剋隆,在體外進行連續培養.應用PCR、逆轉錄PCR(RT-PCR)和免疫細胞化學方法檢測hTERT基因的整閤及錶達情況,併用10%β-巰基乙醇(β-ME)、反式維甲痠(RA)、Forskolin和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對轉化後的hMSC-hTERT細胞進行誘導,使其嚮神經元樣細胞分化.結果外源性hTERT基因在DNA、RNA和蛋白質水平均有錶達,誘導後的hMSC-hTERT細胞錶達神經元特異性標誌物神經覈蛋白(NeuN)和βⅢ微管蛋白(Tubulin-βⅢ).hMSC-hTERT細胞至今已傳至82代.結論外源hTERT基因在hMSC細胞中穩定整閤併錶達,永生化的hMSC細胞繫成功建立:在一定誘導條件下,永生化的hMSC細胞能夠在體外分化成神經元樣細胞.
목적건립영생화적인골수기질세포(hMSC)계,이공신경외과림상화기출연구사용.방법원대배양인골수기질세포,채용함유인단립매역전록매(hTERT)기인적역전록병독재체상청감염hMSC,경사선득도양성극륭,재체외진행련속배양.응용PCR、역전록PCR(RT-PCR)화면역세포화학방법검측hTERT기인적정합급표체정황,병용10%β-구기을순(β-ME)、반식유갑산(RA)、Forskolin화감성성섬유세포생장인자(bFGF)대전화후적hMSC-hTERT세포진행유도,사기향신경원양세포분화.결과외원성hTERT기인재DNA、RNA화단백질수평균유표체,유도후적hMSC-hTERT세포표체신경원특이성표지물신경핵단백(NeuN)화βⅢ미관단백(Tubulin-βⅢ).hMSC-hTERT세포지금이전지82대.결론외원hTERT기인재hMSC세포중은정정합병표체,영생화적hMSC세포계성공건립:재일정유도조건하,영생화적hMSC세포능구재체외분화성신경원양세포.
