CAJ | 학술논문

目的:探讨血脑屏障紧密连接(BBB-tight junction,BBB-TJ)蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在缺氧缺血诱导的体外血脑屏障(BBB)模型通透性增加中的作用及相互关系.方法:ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立体外BBB模型.实验分为正常对照组(C组)、缺氧缺血组(H/I组)、BB-1101预处理组(P组)3组.透射电镜分别观察各组BBB-TJ变化;通过γ计数仪测定核素标记牛血清白蛋白(125I-BSA)通透量检测BBB屏障功能.直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白Actin分布的改变,Westem blot检测Actin、Octludin、ZO-1和MMP-9表达量的改变.结果:电镜观察见C组内皮细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接,免疫荧光检测见细胞骨架蛋白Actin主要分布在细胞膜及细胞核周边,形成肌动蛋白丝带,轮廓内包含大量束状排列有序的微丝结构,细胞间连接紧密.缺氧缺血后,H/I组细胞间连接开放,形成裂隙,而胞膜及胞核周边肌动蛋白丝带模糊、部分断裂,并有应力纤维形成,出现细胞间裂隙,BBB对125I-BSA通透性明显增高,与C组和P组比较,差异有显著性(P＜0.01),同时ZO-1的表达量显著减少,MMP-9的表达显著增多,而Octludin和Actin的表达量无改变.BB-1101预处理后,P组细胞BBB-TJ破坏减少,周边肌动蛋白丝带重新出现,细胞间裂隙较少,125I-BSA通透量较H/I组明显下降(P＜0.01),MMP-9的表达较H/I组也明显减少(P＜0.01).结论:(1)缺氧缺血能促使BBB-TJ的开放进而导致BBB通透性增加;(2)BBB-TJ的开放可能与BBBActin的重组及ZO-1的表达量降低有关;(3)缺氧缺血能增加MMP-9的表达;(4)MMP-9与缺氧缺血时BBBActin的重组及ZO-1的表达减少相关.
목적:탐토혈뇌병장긴밀련접(BBB-tight junction,BBB-TJ)단백화기질금속단백매-9(MMP-9)재결양결혈유도적체외혈뇌병장(BBB)모형통투성증가중적작용급상호관계.방법:ECV304여원대배양적성형효질세포공배양건입체외BBB모형.실험분위정상대조조(C조)、결양결혈조(H/I조)、BB-1101예처리조(P조)3조.투사전경분별관찰각조BBB-TJ변화;통과γ계수의측정핵소표기우혈청백단백(125I-BSA)통투량검측BBB병장공능.직접면역형광관찰세포골가단백Actin분포적개변,Westem blot검측Actin、Octludin、ZO-1화MMP-9표체량적개변.결과:전경관찰견C조내피세포간형성광활、련속、교고밀도적긴밀련접,면역형광검측견세포골가단백Actin주요분포재세포막급세포핵주변,형성기동단백사대,륜곽내포함대량속상배렬유서적미사결구,세포간련접긴밀.결양결혈후,H/I조세포간련접개방,형성렬극,이포막급포핵주변기동단백사대모호、부분단렬,병유응력섬유형성,출현세포간렬극,BBB대125I-BSA통투성명현증고,여C조화P조비교,차이유현저성(P＜0.01),동시ZO-1적표체량현저감소,MMP-9적표체현저증다,이Octludin화Actin적표체량무개변.BB-1101예처리후,P조세포BBB-TJ파배감소,주변기동단백사대중신출현,세포간렬극교소,125I-BSA통투량교H/I조명현하강(P＜0.01),MMP-9적표체교H/I조야명현감소(P＜0.01).결론:(1)결양결혈능촉사BBB-TJ적개방진이도치BBB통투성증가;(2)BBB-TJ적개방가능여BBBActin적중조급ZO-1적표체량강저유관;(3)결양결혈능증가MMP-9적표체;(4)MMP-9여결양결혈시BBBActin적중조급ZO-1적표체감소상관.