中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2009年
4期
346-350
,共5页
虞丽平%韩红辉%石凌超%杜冰%张小平%周忠良%钱旻
虞麗平%韓紅輝%石凌超%杜冰%張小平%週忠良%錢旻
우려평%한홍휘%석릉초%두빙%장소평%주충량%전민
免疫毒素%肝癌%绿脓杆菌外毒素A%特异性结合肽
免疫毒素%肝癌%綠膿桿菌外毒素A%特異性結閤肽
면역독소%간암%록농간균외독소A%특이성결합태
目的:构建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原核表达载体,诱导表达后检测其生物活性.方法:PCR扩增绿脓杆菌外毒素A PE40KDEL基因插入到pET32a(+),然后与合成的含有肠激酶酶切位点和肝癌特异性结合肽A54的核酸序列连接,构建重组表达载体pET32a(+)-A54-PE40KDEL,其经鉴定后转化E.coli BL21 表达.超声破菌,上清液经Ni+亲和层析纯化,肠激酶酶切,再次Ni+离子亲和层析后得到免疫毒素A54-PE40KDEL.MTT和间接免疫荧光技术检测其对不同细胞株的细胞毒性及靶向性.结果:重组质粒序列正确,经Western blot证实表达产物含Mr约58 000的目的蛋白.A54-PE40KDEL能够与肝癌细胞特异性结合,且对肝癌细胞的毒性作用与对照相比有极显著性差异(P＜0.01).结论:成功构建了A54-PE40KDEL原核表达载体;获得的新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL在体外与肝癌细胞具有一定结合特异性及杀伤活性,为肝癌导向治疗提供了一条可行的途径.
目的:構建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原覈錶達載體,誘導錶達後檢測其生物活性.方法:PCR擴增綠膿桿菌外毒素A PE40KDEL基因插入到pET32a(+),然後與閤成的含有腸激酶酶切位點和肝癌特異性結閤肽A54的覈痠序列連接,構建重組錶達載體pET32a(+)-A54-PE40KDEL,其經鑒定後轉化E.coli BL21 錶達.超聲破菌,上清液經Ni+親和層析純化,腸激酶酶切,再次Ni+離子親和層析後得到免疫毒素A54-PE40KDEL.MTT和間接免疫熒光技術檢測其對不同細胞株的細胞毒性及靶嚮性.結果:重組質粒序列正確,經Western blot證實錶達產物含Mr約58 000的目的蛋白.A54-PE40KDEL能夠與肝癌細胞特異性結閤,且對肝癌細胞的毒性作用與對照相比有極顯著性差異(P＜0.01).結論:成功構建瞭A54-PE40KDEL原覈錶達載體;穫得的新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL在體外與肝癌細胞具有一定結閤特異性及殺傷活性,為肝癌導嚮治療提供瞭一條可行的途徑.
목적:구건신형간암면역독소A54-PE40KDEL적원핵표체재체,유도표체후검측기생물활성.방법:PCR확증록농간균외독소A PE40KDEL기인삽입도pET32a(+),연후여합성적함유장격매매절위점화간암특이성결합태A54적핵산서렬련접,구건중조표체재체pET32a(+)-A54-PE40KDEL,기경감정후전화E.coli BL21 표체.초성파균,상청액경Ni+친화층석순화,장격매매절,재차Ni+리자친화층석후득도면역독소A54-PE40KDEL.MTT화간접면역형광기술검측기대불동세포주적세포독성급파향성.결과:중조질립서렬정학,경Western blot증실표체산물함Mr약58 000적목적단백.A54-PE40KDEL능구여간암세포특이성결합,차대간암세포적독성작용여대조상비유겁현저성차이(P＜0.01).결론:성공구건료A54-PE40KDEL원핵표체재체;획득적신형간암면역독소A54-PE40KDEL재체외여간암세포구유일정결합특이성급살상활성,위간암도향치료제공료일조가행적도경.
