科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2009年
3期
255-259,264
,共6页
徐同成%李霞%马晓航%岳珂%开雷%李铎
徐同成%李霞%馬曉航%嶽珂%開雷%李鐸
서동성%리하%마효항%악가%개뢰%리탁
南极假丝酵母%脂肪酶A%克隆%表达%纯化%酶性质
南極假絲酵母%脂肪酶A%剋隆%錶達%純化%酶性質
남겁가사효모%지방매A%극륭%표체%순화%매성질
将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体.并将其电转化入毕赤酵母GS115中.通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子.重组细胞经过120 h培养后.发酵液上清酶活达到13 U/mL.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD.比原始脂肪酶略大.粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后.得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶.该酶最适反应温度为75 ℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性.
將編碼南極假絲酵母脂肪酶A的基因進行剋隆,與pPIC9K連接構建成重組載體.併將其電轉化入畢赤酵母GS115中.通過MD和MM平闆及PCR擴增,篩選和鑒定重組子.重組細胞經過120 h培養後.髮酵液上清酶活達到13 U/mL.聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示,重組脂肪酶分子量約為50 kD.比原始脂肪酶略大.粗酶液經中空纖維素膜超濾濃縮、硫痠銨分級沉澱和離子柱交換層析後.得到在SDS-PAGE上顯示為單一條帶的重組脂肪酶.該酶最適反應溫度為75 ℃,在70℃保持30 min後,仍具90%以上的活性,最適反應pH值為7.0,在pH6.0～8.0的範圍內,具有一定的穩定性.
장편마남겁가사효모지방매A적기인진행극륭,여pPIC9K련접구건성중조재체.병장기전전화입필적효모GS115중.통과MD화MM평판급PCR확증,사선화감정중조자.중조세포경과120 h배양후.발효액상청매활체도13 U/mL.취병희선알응효전영현시,중조지방매분자량약위50 kD.비원시지방매략대.조매액경중공섬유소막초려농축、류산안분급침정화리자주교환층석후.득도재SDS-PAGE상현시위단일조대적중조지방매.해매최괄반응온도위75 ℃,재70℃보지30 min후,잉구90%이상적활성,최괄반응pH치위7.0,재pH6.0～8.0적범위내,구유일정적은정성.
