安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2010年
1期
5-8
,共4页
武标%刘晓颖%范礼斌%邢昕%朱恒锐%汪云飞
武標%劉曉穎%範禮斌%邢昕%硃恆銳%汪雲飛
무표%류효영%범례빈%형흔%주항예%왕운비
基因表达%转染%印迹法,蛋白质
基因錶達%轉染%印跡法,蛋白質
기인표체%전염%인적법,단백질
目的 构建带FLAG标签的人类野生phb2 (prohibitin 2)表达载体,将其转染至HEK 293T细胞检测其表达,转染至COS7细胞观察phb2蛋白在细胞内的定位.方法 以含有人phb2全长cDNA序列的质粒为模板,通过带有FLAG标签上游引物,用PCR方法扩增phb2全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3中构建pCDNA3-FLAG-phb2表达载体,将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.结果 成功构建了pCDNA3-FLAG-phb2表达载体,转染表明此表达载体在HEK 293T细胞中能够有效表达,在COS7细胞中phb2呈斑点状主要在胞质内分布,细胞核中未见到明显的表达.结论 实验结果为进一步了解phb2的功能提供了一定的基础.
目的 構建帶FLAG標籤的人類野生phb2 (prohibitin 2)錶達載體,將其轉染至HEK 293T細胞檢測其錶達,轉染至COS7細胞觀察phb2蛋白在細胞內的定位.方法 以含有人phb2全長cDNA序列的質粒為模闆,通過帶有FLAG標籤上遊引物,用PCR方法擴增phb2全長序列,然後插入真覈錶達載體pCDNA3中構建pCDNA3-FLAG-phb2錶達載體,將構建的質粒轉染至HEK 293T細胞,提取總蛋白,進行Western blot檢測;轉染至COS7細胞,在熒光顯微鏡下觀察其細胞定位.結果 成功構建瞭pCDNA3-FLAG-phb2錶達載體,轉染錶明此錶達載體在HEK 293T細胞中能夠有效錶達,在COS7細胞中phb2呈斑點狀主要在胞質內分佈,細胞覈中未見到明顯的錶達.結論 實驗結果為進一步瞭解phb2的功能提供瞭一定的基礎.
목적 구건대FLAG표첨적인류야생phb2 (prohibitin 2)표체재체,장기전염지HEK 293T세포검측기표체,전염지COS7세포관찰phb2단백재세포내적정위.방법 이함유인phb2전장cDNA서렬적질립위모판,통과대유FLAG표첨상유인물,용PCR방법확증phb2전장서렬,연후삽입진핵표체재체pCDNA3중구건pCDNA3-FLAG-phb2표체재체,장구건적질립전염지HEK 293T세포,제취총단백,진행Western blot검측;전염지COS7세포,재형광현미경하관찰기세포정위.결과 성공구건료pCDNA3-FLAG-phb2표체재체,전염표명차표체재체재HEK 293T세포중능구유효표체,재COS7세포중phb2정반점상주요재포질내분포,세포핵중미견도명현적표체.결론 실험결과위진일보료해phb2적공능제공료일정적기출.
