中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2010年
22期
271-276
,共6页
吴丽民%刘丽华%洪伟雄%王宗华%汪世华%鲁国东
吳麗民%劉麗華%洪偉雄%王宗華%汪世華%魯國東
오려민%류려화%홍위웅%왕종화%왕세화%로국동
稻瘟病菌%α-甘露糖苷酶%多克隆抗体%ELISA%Western印迹分析
稻瘟病菌%α-甘露糖苷酶%多剋隆抗體%ELISA%Western印跡分析
도온병균%α-감로당감매%다극륭항체%ELISA%Western인적분석
为检测α-甘露糖苷酶的表达及其可能的功能,制备了稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多克隆抗体,并探索其可能应用.将与-His标签融合的过量表达一假定α-甘露糖苷酶蛋白的稻瘟病菌转化子,在液体完全培养基中培养,收集其上清液,经Ni2+-NTA亲和柱纯化后,得到可溶的融合蛋白α-甘露糖苷酶-His.纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔,得到抗α-甘露糖苷酶蛋白的多克隆抗体,ELISA检测结果表明抗体效价达1:51200,特异性高.利用该多克隆抗体以ELISA方法检测并Western验证分析稻瘟病菌30个田间菌株培养液α-甘露糖苷酶的表达量.不同菌株α-甘露糖苷酶表达量有明显差异.进一步分析表明,菌株70-15接种水稻后,不同时期α-甘露糖苷酶的表达量差异明显.菌株间致病型等生物学和生理学差异可能与α-甘露糖苷酶表达的差异有关.
為檢測α-甘露糖苷酶的錶達及其可能的功能,製備瞭稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多剋隆抗體,併探索其可能應用.將與-His標籤融閤的過量錶達一假定α-甘露糖苷酶蛋白的稻瘟病菌轉化子,在液體完全培養基中培養,收集其上清液,經Ni2+-NTA親和柱純化後,得到可溶的融閤蛋白α-甘露糖苷酶-His.純化後的融閤蛋白免疫新西蘭兔,得到抗α-甘露糖苷酶蛋白的多剋隆抗體,ELISA檢測結果錶明抗體效價達1:51200,特異性高.利用該多剋隆抗體以ELISA方法檢測併Western驗證分析稻瘟病菌30箇田間菌株培養液α-甘露糖苷酶的錶達量.不同菌株α-甘露糖苷酶錶達量有明顯差異.進一步分析錶明,菌株70-15接種水稻後,不同時期α-甘露糖苷酶的錶達量差異明顯.菌株間緻病型等生物學和生理學差異可能與α-甘露糖苷酶錶達的差異有關.
위검측α-감로당감매적표체급기가능적공능,제비료도온병균일가정α-감로당감매다극륭항체,병탐색기가능응용.장여-His표첨융합적과량표체일가정α-감로당감매단백적도온병균전화자,재액체완전배양기중배양,수집기상청액,경Ni2+-NTA친화주순화후,득도가용적융합단백α-감로당감매-His.순화후적융합단백면역신서란토,득도항α-감로당감매단백적다극륭항체,ELISA검측결과표명항체효개체1:51200,특이성고.이용해다극륭항체이ELISA방법검측병Western험증분석도온병균30개전간균주배양액α-감로당감매적표체량.불동균주α-감로당감매표체량유명현차이.진일보분석표명,균주70-15접충수도후,불동시기α-감로당감매적표체량차이명현.균주간치병형등생물학화생이학차이가능여α-감로당감매표체적차이유관.
