华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2010年
6期
34-37
,共4页
范丙友%高水平%刘改秀%史国安%李嘉珏%孔祥生
範丙友%高水平%劉改秀%史國安%李嘉玨%孔祥生
범병우%고수평%류개수%사국안%리가각%공상생
牡丹%ACC合成酶%反义植物表达载体
牡丹%ACC閤成酶%反義植物錶達載體
모단%ACC합성매%반의식물표체재체
根据GenBank登录的牡丹ACS基因DNA全长序列(FJ769773),设计一对特异性引物,在优化的PCR扩增体系的基础上,应用高保真DNA聚合酶KOD-Plus从洛阳红牡丹叶片总DNA中扩增出牡丹ACC合成酶基因片段PsACS-4.测序结果表明:克隆序列长970 bp,不包含牡丹ACS基因内含子序列,与目标序列同源性达100%;用Sac Ⅰ和Sma Ⅰ对重组质粒和空载体pBI121双酶切、连接,将PsACS-4基因片段反身插入到植物表达载体pBI121的35S启动子下游,成功构建了牡丹ACS反义基因植物表达载体.
根據GenBank登錄的牡丹ACS基因DNA全長序列(FJ769773),設計一對特異性引物,在優化的PCR擴增體繫的基礎上,應用高保真DNA聚閤酶KOD-Plus從洛暘紅牡丹葉片總DNA中擴增齣牡丹ACC閤成酶基因片段PsACS-4.測序結果錶明:剋隆序列長970 bp,不包含牡丹ACS基因內含子序列,與目標序列同源性達100%;用Sac Ⅰ和Sma Ⅰ對重組質粒和空載體pBI121雙酶切、連接,將PsACS-4基因片段反身插入到植物錶達載體pBI121的35S啟動子下遊,成功構建瞭牡丹ACS反義基因植物錶達載體.
근거GenBank등록적모단ACS기인DNA전장서렬(FJ769773),설계일대특이성인물,재우화적PCR확증체계적기출상,응용고보진DNA취합매KOD-Plus종락양홍모단협편총DNA중확증출모단ACC합성매기인편단PsACS-4.측서결과표명:극륭서렬장970 bp,불포함모단ACS기인내함자서렬,여목표서렬동원성체100%;용Sac Ⅰ화Sma Ⅰ대중조질립화공재체pBI121쌍매절、련접,장PsACS-4기인편단반신삽입도식물표체재체pBI121적35S계동자하유,성공구건료모단ACS반의기인식물표체재체.
