中华消化杂志
中華消化雜誌
중화소화잡지
Chinese Journal of Digestion
2007年
9期
593-596
,共4页
王霞%陈萦晅%房静远%陆嵘%孙丹凤%朱红音%李恩灵%沈冠凤
王霞%陳縈晅%房靜遠%陸嶸%孫丹鳳%硃紅音%李恩靈%瀋冠鳳
왕하%진영훤%방정원%륙영%손단봉%주홍음%리은령%침관봉
结肠肿瘤%DNA甲基化%RNA,小分子干扰%丝裂原激活蛋白激酶类%基因表达%遗传载体
結腸腫瘤%DNA甲基化%RNA,小分子榦擾%絲裂原激活蛋白激酶類%基因錶達%遺傳載體
결장종류%DNA갑기화%RNA,소분자간우%사렬원격활단백격매류%기인표체%유전재체
目的 构建丝裂原活化蛋白激酶(MEK)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其静默效应及对结肠癌细胞SW1116生长周期和DNA甲基化的影响.方法 选择MEK不同靶点寡核苷酸片段,克隆到pGCsilencer真核表达载体中.脂质体转染SW1116细胞,荧光显微镜评估转染效率,G418筛选稳定表达siRNA的细胞.Western印迹法检测siRNA对MEK蛋白表达的静默效果.应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞生长活力,流式细胞术分析细胞周期,甲基化特异性PCR和DNA测序检测p16INK4A基因启动子甲基化状态.结果 构建2个靶点的MEK重组质粒,分别转染和联合转染SW1116细胞,转染效率约为72.1%,G418筛选培养2周得到稳定表达MEK siRNA的细胞,MEK蛋白抑制率分别为74.2%和69.1%和90.2%,下游分子ERK蛋白磷酸化水平随之降低;细胞增殖活力下降2～4倍和细胞周期阻滞于G1期,细胞周期负调控因子p16INK4A启动子区呈低甲基化状态.结论 MEK特异性siRNA表达载体对结肠癌细胞MEK蛋白表达有一定的静默效果,多靶点联合效果更好,阻滞细胞周期于G1期,促进p16INK4A基因去甲基化.
目的 構建絲裂原活化蛋白激酶(MEK)基因的小榦擾RNA(siRNA)錶達載體,觀察其靜默效應及對結腸癌細胞SW1116生長週期和DNA甲基化的影響.方法 選擇MEK不同靶點寡覈苷痠片段,剋隆到pGCsilencer真覈錶達載體中.脂質體轉染SW1116細胞,熒光顯微鏡評估轉染效率,G418篩選穩定錶達siRNA的細胞.Western印跡法檢測siRNA對MEK蛋白錶達的靜默效果.應用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法檢測細胞生長活力,流式細胞術分析細胞週期,甲基化特異性PCR和DNA測序檢測p16INK4A基因啟動子甲基化狀態.結果 構建2箇靶點的MEK重組質粒,分彆轉染和聯閤轉染SW1116細胞,轉染效率約為72.1%,G418篩選培養2週得到穩定錶達MEK siRNA的細胞,MEK蛋白抑製率分彆為74.2%和69.1%和90.2%,下遊分子ERK蛋白燐痠化水平隨之降低;細胞增殖活力下降2～4倍和細胞週期阻滯于G1期,細胞週期負調控因子p16INK4A啟動子區呈低甲基化狀態.結論 MEK特異性siRNA錶達載體對結腸癌細胞MEK蛋白錶達有一定的靜默效果,多靶點聯閤效果更好,阻滯細胞週期于G1期,促進p16INK4A基因去甲基化.
목적 구건사렬원활화단백격매(MEK)기인적소간우RNA(siRNA)표체재체,관찰기정묵효응급대결장암세포SW1116생장주기화DNA갑기화적영향.방법 선택MEK불동파점과핵감산편단,극륭도pGCsilencer진핵표체재체중.지질체전염SW1116세포,형광현미경평고전염효솔,G418사선은정표체siRNA적세포.Western인적법검측siRNA대MEK단백표체적정묵효과.응용사갑기우담서염미량매반응비색법검측세포생장활력,류식세포술분석세포주기,갑기화특이성PCR화DNA측서검측p16INK4A기인계동자갑기화상태.결과 구건2개파점적MEK중조질립,분별전염화연합전염SW1116세포,전염효솔약위72.1%,G418사선배양2주득도은정표체MEK siRNA적세포,MEK단백억제솔분별위74.2%화69.1%화90.2%,하유분자ERK단백린산화수평수지강저;세포증식활력하강2～4배화세포주기조체우G1기,세포주기부조공인자p16INK4A계동자구정저갑기화상태.결론 MEK특이성siRNA표체재체대결장암세포MEK단백표체유일정적정묵효과,다파점연합효과경호,조체세포주기우G1기,촉진p16INK4A기인거갑기화.
