CAJ | 학술논문

目的构建抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因重组表达载体.方法从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.用相应的引物进行PCR,扩增出轻链和重链Fd段基因,经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-blue菌株,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中.结果从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700bD大小的κ、λ和Fd基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5kv,200Ω,25μF的条件下电转化,最终转化率为:2.48×107.随机挑取电转化后的10个菌落,经PCR鉴定,共有5个克隆同时含有轻链和重链Fd基因,抗体Fab的重组率为50%.结论获得的抗体Fab重组表达载体是高效、实用的,为下一步构建抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库打下基础.
목적구건항시선염병독항체Fab단기인중조표체재체.방법종시선염환자화시선염항체IgG양성정상인군적림파세포중제취총RNA,역전록성cDNA.용상응적인물진행PCR,확증출경련화중련Fd단기인,경매절후분별화서립재체pComb3련접,재경전천공전화대장간균XL1-blue균주,장경련화중련Fd기인선후극륭입pComb3중.결과종분리출적림파세포중공제취고질량RNA약110μg,경역전록、PCR,분별확증출약700bD대소적κ、λ화Fd기인.PCR산물화재체경순화、쌍매절후진행련접,재2.5kv,200Ω,25μF적조건하전전화,최종전화솔위:2.48×107.수궤도취전전화후적10개균락,경PCR감정,공유5개극륭동시함유경련화중련Fd기인,항체Fab적중조솔위50%.결론획득적항체Fab중조표체재체시고효、실용적,위하일보구건항시선염병독서균체항체고타하기출.