自然科学进展
自然科學進展
자연과학진전
zirankexuejinzhan
2000年
12期
1099-1103
,共5页
刘军%童迎凯%柳惠图%张伟%高萍
劉軍%童迎凱%柳惠圖%張偉%高萍
류군%동영개%류혜도%장위%고평
P15INK4b CKI 细胞周期 G1期相关基因表达 细胞同步化
P15INK4b CKI 細胞週期 G1期相關基因錶達 細胞同步化
P15INK4b CKI 세포주기 G1기상관기인표체 세포동보화
人黑色素瘤细胞A375是P15INK4b缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15INK4bcDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15INK4b稳定表达细胞模型MLIK6.流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G1期升高11%,S期下降14%.利用TdR-N2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1%和76.8%,而G1期的比例分别为74.3%和76.4%.3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱.进一步探讨P15INK4b对G1/S相关调控基因的影响,发现G1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G1→S全部时间进程中.说明P15INK4b是通过对G1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G1/S进程.
人黑色素瘤細胞A375是P15INK4b缺失細胞繫,通過細胞轉染技術將外源P15INK4bcDNA轉染A375細胞,經PCR和Western blot檢測,證明構建瞭P15INK4b穩定錶達細胞模型MLIK6.流式細胞光度術結果顯示,與對照組MLC2相比,MLIK6細胞G1期升高11%,S期下降14%.利用TdR-N2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期細胞比例分彆達到89.1%和76.8%,而G1期的比例分彆為74.3%和76.4%.3H-TdR摻入的結果顯示,MLIK6從G1期進入S期的時間比MLC2延長2 h,併且摻入彊度明顯減弱.進一步探討P15INK4b對G1/S相關調控基因的影響,髮現G1期的MLIK6細胞在誘導P27錶達升高的同時,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑製在晚G1期附近最顯著,而對cyclinE的抑製則在G1/S轉換處錶現突齣,癌基因c-myc錶達受到明顯抑製併貫穿于G1→S全部時間進程中.說明P15INK4b是通過對G1期不同階段細胞週期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑製及增加CKI P27延緩瞭G1/S進程.
인흑색소류세포A375시P15INK4b결실세포계,통과세포전염기술장외원P15INK4bcDNA전염A375세포,경PCR화Western blot검측,증명구건료P15INK4b은정표체세포모형MLIK6.류식세포광도술결과현시,여대조조MLC2상비,MLIK6세포G1기승고11%,S기하강14%.이용TdR-N2O동보법소득동보적MLIK6화MLC2적M기세포비례분별체도89.1%화76.8%,이G1기적비례분별위74.3%화76.4%.3H-TdR참입적결과현시,MLIK6종G1기진입S기적시간비MLC2연장2 h,병차참입강도명현감약.진일보탐토P15INK4b대G1/S상관조공기인적영향,발현G1기적MLIK6세포재유도P27표체승고적동시,cyclinD1,CdK4,cyclinE화c-myc적단백수평균강저,기중cyclinD1적억제재만G1기부근최현저,이대cyclinE적억제칙재G1/S전환처표현돌출,암기인c-myc표체수도명현억제병관천우G1→S전부시간진정중.설명P15INK4b시통과대G1기불동계단세포주기인경분자cyclinD1,CdK4,cyclinE화암기인c-myc적억제급증가CKI P27연완료G1/S진정.
