微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
2期
241-246
,共6页
陆宇%赵晗%王勤鹏%刘巍峰%肖敏
陸宇%趙晗%王勤鵬%劉巍峰%肖敏
륙우%조함%왕근붕%류외봉%초민
双歧杆菌%α-D-半乳糖苷酶%温度诱导表达
雙歧桿菌%α-D-半乳糖苷酶%溫度誘導錶達
쌍기간균%α-D-반유당감매%온도유도표체
短双歧杆菌(Bifidobacterium breve 203)α-D-半乳糖苷酶基因(aga1)被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV220中,构建重组质粒pBVaga1,转入大肠杆菌进行温度诱导表达,得到的重组酶Aga1在大肠杆菌DH5α、DH10B和BL21中的比活分别为28.08、19.44和13.85U/mg, 均高于短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶的比活1.76U/mg.重组质粒pBVaga1在E. coli BL21中稳定性较好.重组酶Aga1蛋白亚基分子量约67kD,最适反应温度为45℃,酶在40℃以下稳定,60℃仅剩余约5%的酶活性,70℃时酶全部失活;最适反应pH为4.0～4.4,酶在pH 3.6～6.0范围内稳定;酶对p-硝基苯酚-α-半乳糖苷的Km＝1.43mmol/L,Vmax＝35.71μmol/(L·min),对蜜二糖的Km＝261mmol/L,Vmax＝63.69μmol/(L·min);酶在蜜二糖、棉子糖水解体系中不显示转糖基活性.结果说明Aga1与已经报道的一种短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶不同,是新发现的一种短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶.
短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve 203)α-D-半乳糖苷酶基因(aga1)被剋隆到大腸桿菌溫度誘導錶達質粒pBV220中,構建重組質粒pBVaga1,轉入大腸桿菌進行溫度誘導錶達,得到的重組酶Aga1在大腸桿菌DH5α、DH10B和BL21中的比活分彆為28.08、19.44和13.85U/mg, 均高于短雙歧桿菌α-D-半乳糖苷酶的比活1.76U/mg.重組質粒pBVaga1在E. coli BL21中穩定性較好.重組酶Aga1蛋白亞基分子量約67kD,最適反應溫度為45℃,酶在40℃以下穩定,60℃僅剩餘約5%的酶活性,70℃時酶全部失活;最適反應pH為4.0～4.4,酶在pH 3.6～6.0範圍內穩定;酶對p-硝基苯酚-α-半乳糖苷的Km＝1.43mmol/L,Vmax＝35.71μmol/(L·min),對蜜二糖的Km＝261mmol/L,Vmax＝63.69μmol/(L·min);酶在蜜二糖、棉子糖水解體繫中不顯示轉糖基活性.結果說明Aga1與已經報道的一種短雙歧桿菌的α-D-半乳糖苷酶不同,是新髮現的一種短雙歧桿菌的α-D-半乳糖苷酶.
단쌍기간균(Bifidobacterium breve 203)α-D-반유당감매기인(aga1)피극륭도대장간균온도유도표체질립pBV220중,구건중조질립pBVaga1,전입대장간균진행온도유도표체,득도적중조매Aga1재대장간균DH5α、DH10B화BL21중적비활분별위28.08、19.44화13.85U/mg, 균고우단쌍기간균α-D-반유당감매적비활1.76U/mg.중조질립pBVaga1재E. coli BL21중은정성교호.중조매Aga1단백아기분자량약67kD,최괄반응온도위45℃,매재40℃이하은정,60℃부잉여약5%적매활성,70℃시매전부실활;최괄반응pH위4.0～4.4,매재pH 3.6～6.0범위내은정;매대p-초기분분-α-반유당감적Km＝1.43mmol/L,Vmax＝35.71μmol/(L·min),대밀이당적Km＝261mmol/L,Vmax＝63.69μmol/(L·min);매재밀이당、면자당수해체계중불현시전당기활성.결과설명Aga1여이경보도적일충단쌍기간균적α-D-반유당감매불동,시신발현적일충단쌍기간균적α-D-반유당감매.
