热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2006年
6期
656-659
,共4页
刘志刚%杨慧%付颖媛%高波%朱健琦%吉坤美
劉誌剛%楊慧%付穎媛%高波%硃健琦%吉坤美
류지강%양혜%부영원%고파%주건기%길곤미
屋尘螨%变应原%Der p 1%融合蛋白%复性%纯化
屋塵螨%變應原%Der p 1%融閤蛋白%複性%純化
옥진만%변응원%Der p 1%융합단백%복성%순화
目的建立屋尘螨主要变应原Der p 1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性.方法大量诱导表达含pET24a-Der p 1质粒的BL 21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Der p 1纯化蛋白的抗原活性.结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Der p 1蛋白.Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Der p 1蛋白呈强阳性反应,最佳血清稀释度为1:64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应.结论纯化后的融合蛋白Der p 1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子.
目的建立屋塵螨主要變應原Der p 1蛋白原覈錶達產物的純化方法,穫得理想的錶達產物併鑒定其免疫原性.方法大量誘導錶達含pET24a-Der p 1質粒的BL 21工程菌,錶達產物以重組蛋白包涵體的形式存在,包涵體經洗滌與溶解後,使用結閤6組氨痠的鎳柱進行親和層析純化蛋白質,用稀釋複性方法進行重組蛋白的複性,再用屋塵螨過敏性哮喘患者暘性血清經Dot-ELISA方法分析Der p 1純化蛋白的抗原活性.結果分步洗滌可有效去除重組蛋白包涵體沉澱中混雜的多數雜蛋白成分,親和層析分離可穫得高純度重組變應原Der p 1蛋白.Dot-ELISA法檢測結果錶明經複性併純化的Der p 1蛋白呈彊暘性反應,最佳血清稀釋度為1:64,而重組蛋白與正常人血清呈陰性反應.結論純化後的融閤蛋白Der p 1具有較高的純度及較彊的免疫活性,可望作為有效的屋塵螨變應原診斷試劑和疫苗的候選分子.
목적건립옥진만주요변응원Der p 1단백원핵표체산물적순화방법,획득이상적표체산물병감정기면역원성.방법대량유도표체함pET24a-Der p 1질립적BL 21공정균,표체산물이중조단백포함체적형식존재,포함체경세조여용해후,사용결합6조안산적얼주진행친화층석순화단백질,용희석복성방법진행중조단백적복성,재용옥진만과민성효천환자양성혈청경Dot-ELISA방법분석Der p 1순화단백적항원활성.결과분보세조가유효거제중조단백포함체침정중혼잡적다수잡단백성분,친화층석분리가획득고순도중조변응원Der p 1단백.Dot-ELISA법검측결과표명경복성병순화적Der p 1단백정강양성반응,최가혈청희석도위1:64,이중조단백여정상인혈청정음성반응.결론순화후적융합단백Der p 1구유교고적순도급교강적면역활성,가망작위유효적옥진만변응원진단시제화역묘적후선분자.
