微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
1期
30-34
,共5页
余健%周志军%彭祥兵%朱华松%施金荣%余模松
餘健%週誌軍%彭祥兵%硃華鬆%施金榮%餘模鬆
여건%주지군%팽상병%주화송%시금영%여모송
牛血清白蛋白%筛选%单克隆抗体%酶联免疫吸附试验
牛血清白蛋白%篩選%單剋隆抗體%酶聯免疫吸附試驗
우혈청백단백%사선%단극륭항체%매련면역흡부시험
用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8.鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;Western Blotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3＞2A5＞3G6＞4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定.
用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0進行融閤,培養上清經過雙抗體夾心法檢測初步篩選分泌鼠IgG的雜交瘤細胞,將此種雜交瘤細胞註射小鼠產生的腹水用間接ELISA法篩選,穫得4株能穩定分泌抗BSA單剋隆抗體的雜交瘤細胞株,分彆命名為2A5、3A3、3G6、4A8.鑒定結果顯示,2A5細胞分泌IgG2a/κ,其餘3株細胞分泌IgG1/κ;純化後4株腹水單抗的純度達90%以上,對BSA的ELISA滴度均可達到1∶100000以上;4株單抗均不與人以及馬、豬、羊、兔、豚鼠等血清髮生交扠反應;Western Blotting試驗證明4株單抗均識彆分子量為68000的BSA;用間接ELISA法測定4株單抗相對親和力及相對敏感度大小依次為3A3＞2A5＞3G6＞4A8;雜交瘤細胞株連續培養3箇月以及凍存半年後複囌,細胞生長良好,雜交瘤細胞分泌的抗體效價穩定.
용우혈청백단백(BSA)면역BALB/c소서,취기비세포여소서골수류세포SP2/0진행융합,배양상청경과쌍항체협심법검측초보사선분비서IgG적잡교류세포,장차충잡교류세포주사소서산생적복수용간접ELISA법사선,획득4주능은정분비항BSA단극륭항체적잡교류세포주,분별명명위2A5、3A3、3G6、4A8.감정결과현시,2A5세포분비IgG2a/κ,기여3주세포분비IgG1/κ;순화후4주복수단항적순도체90%이상,대BSA적ELISA적도균가체도1∶100000이상;4주단항균불여인이급마、저、양、토、돈서등혈청발생교차반응;Western Blotting시험증명4주단항균식별분자량위68000적BSA;용간접ELISA법측정4주단항상대친화력급상대민감도대소의차위3A3＞2A5＞3G6＞4A8;잡교류세포주련속배양3개월이급동존반년후복소,세포생장량호,잡교류세포분비적항체효개은정.
