中国药学杂志
中國藥學雜誌
중국약학잡지
CHINESE PHARMACEUTICAL JOURNAL
2007年
9期
652-655
,共4页
刘秋英%王一飞%熊盛%张美英%钱垂文%何旭君
劉鞦英%王一飛%熊盛%張美英%錢垂文%何旭君
류추영%왕일비%웅성%장미영%전수문%하욱군
TAT%核苷二磷酸激酶A蛋白%融合蛋白
TAT%覈苷二燐痠激酶A蛋白%融閤蛋白
TAT%핵감이린산격매A단백%융합단백
目的 构建pET-TAT-nm23-H1质粒,表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融合蛋白,并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞.方法 人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK-A引物的上游,PCR扩增后将融合基因克隆到pET28(a)原核表达载体上,经IPTG诱导表达、镍离子树脂色谱纯化TAT-NDPK-A蛋白,Westen-blot鉴定分析重组蛋白的抗原性,将TAT-NDPK-A蛋白加入到A549细胞中,荧光免疫组化检测蛋白穿膜进入细胞内.结果 TAT序列与NDPK-A正确融合并插入pET28(a)载体上,经诱导表达纯化成功获得纯度为97%的TAT-NDPK-A蛋白,在培养的A549细胞中加入重组蛋白4 h后在细胞内检测到穿膜的蛋白.结论 构建表达TAT-NDPK-A蛋白,TAT序列能够引导重组蛋白穿过细胞膜进入细胞内,为进一步研究基因的功能奠定了基础.
目的 構建pET-TAT-nm23-H1質粒,錶達TAT-覈苷二燐痠激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融閤蛋白,併研究融閤蛋白穿膜進入A549細胞.方法 人工閤成編碼TAT蛋白轉導區域的11箇氨基痠序列于NDPK-A引物的上遊,PCR擴增後將融閤基因剋隆到pET28(a)原覈錶達載體上,經IPTG誘導錶達、鎳離子樹脂色譜純化TAT-NDPK-A蛋白,Westen-blot鑒定分析重組蛋白的抗原性,將TAT-NDPK-A蛋白加入到A549細胞中,熒光免疫組化檢測蛋白穿膜進入細胞內.結果 TAT序列與NDPK-A正確融閤併插入pET28(a)載體上,經誘導錶達純化成功穫得純度為97%的TAT-NDPK-A蛋白,在培養的A549細胞中加入重組蛋白4 h後在細胞內檢測到穿膜的蛋白.結論 構建錶達TAT-NDPK-A蛋白,TAT序列能夠引導重組蛋白穿過細胞膜進入細胞內,為進一步研究基因的功能奠定瞭基礎.
목적 구건pET-TAT-nm23-H1질립,표체TAT-핵감이린산격매A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)융합단백,병연구융합단백천막진입A549세포.방법 인공합성편마TAT단백전도구역적11개안기산서렬우NDPK-A인물적상유,PCR확증후장융합기인극륭도pET28(a)원핵표체재체상,경IPTG유도표체、얼리자수지색보순화TAT-NDPK-A단백,Westen-blot감정분석중조단백적항원성,장TAT-NDPK-A단백가입도A549세포중,형광면역조화검측단백천막진입세포내.결과 TAT서렬여NDPK-A정학융합병삽입pET28(a)재체상,경유도표체순화성공획득순도위97%적TAT-NDPK-A단백,재배양적A549세포중가입중조단백4 h후재세포내검측도천막적단백.결론 구건표체TAT-NDPK-A단백,TAT서렬능구인도중조단백천과세포막진입세포내,위진일보연구기인적공능전정료기출.
