CAJ | 학술논문

目的:构建海南坡鹿外周血白细胞eDNA文库.方法:采用RNAiso Reagent (TAKARA)处理新鲜血液,以总BNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA.利用SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)技术,用PaWerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PeR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMA APIN-400TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNRLIB载体连接,电转化入E.coli DG5a,建成原始文库.然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小.结果:经鉴定,库容量达到1.9×106克隆,原始文库滴度为1.59×1010cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×1012cfi/mL.插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb.结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础.
목적:구건해남파록외주혈백세포eDNA문고.방법:채용RNAiso Reagent (TAKARA)처리신선혈액,이총BNA추제시제합(상해화순)제비총RNA.이용SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)기술,용PaWerscriptTM반전록매역전록합성제일련cDNA,LD-PeR확증획득cDNA쌍련,Sfi I매절화CHROMA APIN-400TM주분급분리후,500bp이상적편단여pDNRLIB재체련접,전전화입E.coli DG5a,건성원시문고.연후확증문고병수궤도취단균락,매절감정중조자삽입편단대소.결과:경감정,고용량체도1.9×106극륭,원시문고적도위1.59×1010cfu/mL,중조솔접근100%,확증후적문고적도위7.4×1012cfi/mL.삽입편단대소분포위0.5～2.0kb,평균장도약위1.0kb.결론:소구건문고적각항지표균체도요구,위사선해남파록이지화미지공능기인제공료재료래원,차위진일보연구기인적결구화공능전정료중요기출.