CAJ | 학술논문

背景:脂肪干细胞在特定的培养条件下可向软骨细胞分化,软骨形态发生蛋白1是重要的调节软骨细胞分化的生长因子.前期实验已证实了软骨形态发生蛋白1诱导大鼠脂肪干细胞体外可向软骨细胞形态分化,但是能否在体内成软骨呢?目的:验证应用软骨形态发生蛋白1体外诱导SD仔鼠脂肪干细胞,复合自制牛松质骨支架材料植于裸鼠皮下成软骨情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-11/2008-05在解放军第四军医大学基础部实验动物中心、解放军第四军医大学西京医院全军骨科实验研究所完成.材料:7 d龄SD仔鼠16只用于分离培养脂肪下细胞及软骨细胞,20只成年裸小鼠用于进行体内埋植实验,雌雄不限.方法:体外培养的脂肪干细胞复合于支架上,加入诱导液(基础培养液+50 μg/L软骨形态发生蛋白1)继续培养2周作为实验组:将SD仔鼠软骨细胞复合于支架上,常规培养2周作为对照组.20只裸小鼠,左侧腋窝皮下均植入实验组细胞-支架复合物,右侧腋窝皮下均植入对照组细胞-支架复合物.8,12周各处死10只,行甲苯胺蓝和番红O-固绿染色.主要观察指标:①细胞形态变化及扫描电镜观察细胞-支架复合物.②四甲基偶氮唑盐法测定实验组和对照组细胞各代的增殖情况.③裸小鼠体内埋植实验结果.结果:扫描电镜示,软骨细胞和经软骨形态发生蛋白1诱导的脂肪干细胞在自制牛松质骨支架上均生长良好,平均孔径约为382 μ m.经软骨形态发生蛋白1诱导的第2,3,4,5,6代脂肪干细胞(诱导组)生长良好并保持持续增殖趋势;对照组的软骨细胞从第4代开始生长缓慢.裸小鼠体内埋植12周时,番红O-固绿染色:实验组阳性,细胞呈球形,可见软骨陷窝;对照组阴性,细胞呈梭形.但两组支架都已降解.结论:软骨形态发生蛋白1体外诱导SD仔鼠脂肪干细胞,复合自制牛松质骨支架,裸鼠体内可成软骨. 揹景:脂肪榦細胞在特定的培養條件下可嚮軟骨細胞分化,軟骨形態髮生蛋白1是重要的調節軟骨細胞分化的生長因子.前期實驗已證實瞭軟骨形態髮生蛋白1誘導大鼠脂肪榦細胞體外可嚮軟骨細胞形態分化,但是能否在體內成軟骨呢?目的:驗證應用軟骨形態髮生蛋白1體外誘導SD仔鼠脂肪榦細胞,複閤自製牛鬆質骨支架材料植于裸鼠皮下成軟骨情況.設計、時間及地點:隨機對照動物實驗,于2007-11/2008-05在解放軍第四軍醫大學基礎部實驗動物中心、解放軍第四軍醫大學西京醫院全軍骨科實驗研究所完成.材料:7 d齡SD仔鼠16隻用于分離培養脂肪下細胞及軟骨細胞,20隻成年裸小鼠用于進行體內埋植實驗,雌雄不限.方法:體外培養的脂肪榦細胞複閤于支架上,加入誘導液(基礎培養液+50 μg/L軟骨形態髮生蛋白1)繼續培養2週作為實驗組:將SD仔鼠軟骨細胞複閤于支架上,常規培養2週作為對照組.20隻裸小鼠,左側腋窩皮下均植入實驗組細胞-支架複閤物,右側腋窩皮下均植入對照組細胞-支架複閤物.8,12週各處死10隻,行甲苯胺藍和番紅O-固綠染色.主要觀察指標:①細胞形態變化及掃描電鏡觀察細胞-支架複閤物.②四甲基偶氮唑鹽法測定實驗組和對照組細胞各代的增殖情況.③裸小鼠體內埋植實驗結果.結果:掃描電鏡示,軟骨細胞和經軟骨形態髮生蛋白1誘導的脂肪榦細胞在自製牛鬆質骨支架上均生長良好,平均孔徑約為382 μ m.經軟骨形態髮生蛋白1誘導的第2,3,4,5,6代脂肪榦細胞(誘導組)生長良好併保持持續增殖趨勢;對照組的軟骨細胞從第4代開始生長緩慢.裸小鼠體內埋植12週時,番紅O-固綠染色:實驗組暘性,細胞呈毬形,可見軟骨陷窩;對照組陰性,細胞呈梭形.但兩組支架都已降解.結論:軟骨形態髮生蛋白1體外誘導SD仔鼠脂肪榦細胞,複閤自製牛鬆質骨支架,裸鼠體內可成軟骨.
배경:지방간세포재특정적배양조건하가향연골세포분화,연골형태발생단백1시중요적조절연골세포분화적생장인자.전기실험이증실료연골형태발생단백1유도대서지방간세포체외가향연골세포형태분화,단시능부재체내성연골니?목적:험증응용연골형태발생단백1체외유도SD자서지방간세포,복합자제우송질골지가재료식우라서피하성연골정황.설계、시간급지점:수궤대조동물실험,우2007-11/2008-05재해방군제사군의대학기출부실험동물중심、해방군제사군의대학서경의원전군골과실험연구소완성.재료:7 d령SD자서16지용우분리배양지방하세포급연골세포,20지성년라소서용우진행체내매식실험,자웅불한.방법:체외배양적지방간세포복합우지가상,가입유도액(기출배양액+50 μg/L연골형태발생단백1)계속배양2주작위실험조:장SD자서연골세포복합우지가상,상규배양2주작위대조조.20지라소서,좌측액와피하균식입실험조세포-지가복합물,우측액와피하균식입대조조세포-지가복합물.8,12주각처사10지,행갑분알람화번홍O-고록염색.주요관찰지표:①세포형태변화급소묘전경관찰세포-지가복합물.②사갑기우담서염법측정실험조화대조조세포각대적증식정황.③라소서체내매식실험결과.결과:소묘전경시,연골세포화경연골형태발생단백1유도적지방간세포재자제우송질골지가상균생장량호,평균공경약위382 μ m.경연골형태발생단백1유도적제2,3,4,5,6대지방간세포(유도조)생장량호병보지지속증식추세;대조조적연골세포종제4대개시생장완만.라소서체내매식12주시,번홍O-고록염색:실험조양성,세포정구형,가견연골함와;대조조음성,세포정사형.단량조지가도이강해.결론:연골형태발생단백1체외유도SD자서지방간세포,복합자제우송질골지가,라서체내가성연골.